Urin og spyt test for tuberkulose

Forskelligheden af ​​forskellige tests for tuberkulose forklares ikke af den lette diagnosticering af denne sygdom, men af ​​sin listighed. Siden antikken har folk forsøgt at finde en måde at identificere phthisis i de tidlige stadier og udførte derfor forskellige undersøgelser af patienter, hvoraf nogle virkelig var vant som metoder til at diagnosticere en lidelse eller som måder at observere sygdomsprocessen på.

Hvad er urin og spyt test for?

En tankprøve for tuberkulose af spyt og urin udføres for at detektere tilstedeværelsen af ​​et patogen inde i kroppen. Samtidig er målet med disse undersøgelser mere sandsynligt at bekræfte sygdommen med de eksisterende symptomer, og ikke at finde det, da der findes mange andre mere pålidelige metoder til den første forebyggende diagnose.

Derudover kan læger foretage en urin- eller sputumprøve samt analyse af spyt til tuberkulose for at identificere processen med overgang af den lukkede form af sygdommen til det åbne, hvilket er kendetegnet ved frigivelse af et stort antal baciller med naturlige væsker og patientens afføring og derfor bliver meget epidemiologisk farlig for andre.

Urinprøve

Svaret på spørgsmålet om, hvordan man skal bestå en urintest for tuberkulose er ret simpelt. Urin til tuberkulose indsamles som enhver generel analyse af denne væske, der er kendt for alle fra barndommen:

  1. Det er nødvendigt om morgenen at samle den første del af urinen, mens man kun samler midterdelen, og ikke den der går først eller sidst.
  2. Før opsamling er det nødvendigt at vaske både beholderen og urinorganerne selv grundigt, så intet kan komme ind i krukken: protein, blod, bakterier osv.
  3. Den nødvendige mængde væske til undersøgelsen af ​​kun 50-100 ml, så du bør ikke bære en halv liter urin.

OAM kan tages på enhver klinik, men tuberkulose baciller kan kun findes i specielle laboratorier, der ikke er tilgængelige på alle lokaliteter i Rusland. De normale resultater af denne undersøgelse er som følger:

  1. Farve: gul, solgul eller halm.
  2. Gennemsigtighed: høj.
  3. Lugte: uskarpe
  4. PH reaktion: 4-7.
  5. Densitet: 1012-1022 g / l.
  6. Protein: nej, men undertiden op til 0,033 g / l er acceptabelt.
  7. Glucose: op til 0,8 mmol / l.
  8. Ketonlegemer: nej.
  9. Bilirubin: nej.
  10. Urobilinogen: 5-10 mg / l.
  11. Hæmoglobin: nej.
  12. Erythrocytter: hos kvinder er den maksimale tilladte værdi op til tre, og hos mænd er op til 1 i syne.
  13. Leukocytter: Det tilladte antal organer i synsfeltet er op til 6 hos kvinder og op til tre hos mænd.
  14. Epitelceller: op til 10 stk. i sikte.
  15. Cylindre: ingen eller enkelt hyaline til stede.
  16. Salt: nej.
  17. Bakterier: nej.
  18. Svampe: nej.
  19. Parasitter: nej, men hvis det er, så er det ikke skræmmende: bare i dette tilfælde udføres terapi med anthelmintiske lægemidler.

OAM satser for tuberkulose forbliver normalt de samme. Den eneste undtagelse er akutte former for sygdommen, når urinen forandrer sig på grund af forstyrrelse af de indre organer samt kroniske læsioner af lungerne eller knoglerne, når der kan være tegn på amyloidose i analysen - en overtrædelse af proteinmetabolisme, hvor resultaterne af undersøgelsen vil indeholde protein.

Undtagelsen er tuberkulose af nyrerne eller urinvejen - den mest almindelige ekstrapulmonale form af sygdommen, der skyldes overførsel af infektion fra blodbanen, hvor urinalyse af tuberkulose varierer meget. I dette tilfælde observeres følgende fænomener:

  • stærkt sur persistent reaktion;
  • leukocyturi - leukocytter i urinen
  • proteinuri - protein i urinen
  • erytrocyturi - blod i urinen
  • pyuria - pus i urinen.

Også i den akutte form af sygdommen eller under tuberkulose af nyrerne og urinvejen i urinen er der en aktiv form for patogenens baciller, som bestemmes ved farvningsmetoden ifølge Zil-Nelson.

Spyt test

Faktisk producerer BAC ikke analyse af spyt for tuberkulose. Analysen af ​​spyt er ofte uvidende mennesker kalder studiet af sputum for tuberkulose. I stedet for en sputumprøve kan analysen af ​​spyt til tuberkulose kun udføres i tilfælde af meget små nyfødte børn, der ikke er i stand til at spytte ekspektorator, fordi det automatisk slukker umiddelbart efter ekspektorering. Men i dette tilfælde tager lægerne simpelthen biopsi af vævet eller trækker lungesekretionen ved hjælp af en sonde og sværmer ikke med spyt.

Sputumanalyse af patogenet udføres også under anvendelse af Ziehl-Nelson-metoden. Ud over baciller kan nogle tegn på lungepatologi overvejes med det blotte øje: fibrøse støber, pus, blod, vævsstykker og såkaldte linser - store indeslutninger med en pinhead eller mindre runde form, hvor der normalt er et stort antal baciller.

Ziehl-Nelson-farvningsmetode

Ziel-Nelson-farvningsmetoden er baseret på den sure resistens af Mycobacterium tuberculosis, som kun kan farves ved varmebehandling. I løbet af denne undersøgelse skal kroppens væv, sputum, urin, blod eller et hvilket som helst andet stof, hvis analyse for tilstedeværelsen af ​​MBT skal gøres, efterlades i et gunstigt miljø til plantning af baciller til reproduktion, hvis de er der selvfølgelig og derefter opvarmes og farves. Derefter opbevares alt i syre indtil misfarvning og igen males uden opvarmning til en anden farve. Som et resultat er kontoret ret nemt at opdage, da de forbliver farverne i den første farvning og skiller sig godt ud mod den generelle baggrund.

Phthisiology Notebook - Tuberkulose

Alt hvad du vil vide om tuberkulose

Blod- og urintest for tuberkulose

VA Koshechkin, Z.A. Ivanova

Elementer af rødt blod, som regel, ændrer sig lidt med tuberkulose. Først efter akutt tab af blod fra lungerne eller tarmene kan anæmi overholdes. Et svagt fald i hæmoglobin kan ses i kroniske former for fibro-cavernøs lungtubberkulose.

En af indikatorerne for aktiviteten af ​​den tuberkuløse proces er ESR (erythrocytsedimenteringshastighed). Accelereret ESR korrelerer ikke kun med aktiviteten og omfanget af den nuværende friske proces, men også med forværringen af ​​kroniske, især fibro-cavernøse processer.

Elementer af leukocytfraktionen af ​​blodet reagerer mere aktivt på den tuberkuløse proces.
Konventionelt er der tre faser af ændringer i leukocytfraktionen af ​​blod forbundet med arten af ​​læsioner i lungetuberkulose.
1. Kampens neutrofile fase. I blodet øges andelen af ​​neutrofiler, hvilket resulterer i et skifte af formlen til venstre. Eosinofiler er fraværende, antallet af lymfocytter og monocytter er reduceret.
2. Monocytfase - overvinde infektion. I blodet øges antallet af lymfocytter, blodformlen forskydes til venstre, antallet af neutrofiler reduceres, enkelt eosinofiler detekteres.
3. Fasegenvinding. Andelen lymfocytter og eosinofiler øges. Blodtællinger normaliseres gradvist.
Denne adskillelse i faser reflekterer kun den samlede blodreaktion.

Nuklear neutrofile skift i tuberkulose
Foruden kvantitative har gruppen af ​​neutrofiler en kvalitativ egenskab, som er meget tyndere og tidligere angiver en række patologiske processer.

Voksen tuberkulose er normalt en sekundær proces, oftest forårsager det kun en stigning i stabile neutrofiler i blodet. Med udpræget infiltrative-pneumoniske former og fænomener af lungevævsintegration afsløres forskydningen af ​​neutrofiler til venstre helt klart og kan nå op til 20-30% af båndkernen.

Det pulmonale infiltrat desintegreres ikke, og fokale former for tuberkulose i perioden med deres første detektion eller eksacerbation ved subfebril temperatur og lavtliggende funktionelle lidelser giver et mindre markant skift. Imidlertid kan de resterende elementer i hemogrammet muligvis ikke opdage abnormiteter overhovedet. Derfor får en grundig definition af atomforskydningen særlig betydning for tuberkulose.

Læren om neutrofile atomforskydning blev fremskyndet af Arnet (1905) baseret på en undersøgelse af blod i forskellige infektioner, herunder tuberkulose.

Ved at lave komplekse beregninger med mange skitser bemærkede Arneth en vis regelmæssighed i konfigurationen af ​​neutrofile kerner.

En sund persons blod indeholder:

  • 5% neutrofiler med ufortyndede bannere, ikke-segmenterede kerner (I klasse);
  • 35% neutrofiler med to segmenter forbundet med trådlignende sammenbrud (klasse II);
  • 41% af neutrofiler med tre segmenter (klasse III);
  • 17% neutrofiler med fire segmenter (klasse IV);
  • 2% neutrofiler med fem segmenter (V klasse).

Ud over segmenteringen af ​​kernen tog Arnet hensyn til dens form. Således udpegede han for første klasse en række underklasser efter graden af ​​indrykning af den ikke-segmenterede kerne. De resterende klasser er opdelt i underklasser afhængigt af formen af ​​segmenterne.

Ved infektioner i forhold til deres sværhedsgrad falder antallet af multi-segmenterede former, antallet af lavsegmenterede (2-3 segmenter) og ikke-segmenterede (der er relativt unge celler) forøges.

I Arneth-ordningen er antallet af ikke-segmenterede klasse I neutrofiler vist til venstre; til højre er antallet af klasse II-celler placeret, derefter klasse III osv. Som følge heraf øges antallet af celler i venstre side af kredsløbet med en stigning i ikke-segmenterede og lavsegmenterede former, og der er et "venstre skifte".

Urinanalyse
Urin udskillelse hos tuberkulose patienter er næsten normal. Patologiske ændringer i urinen kan være i nederlag af tuberkulose i nyrerne eller urinvejen.
Hos patienter med kroniske former for lungetuberkulose kan tegn på amyloidose detekteres.

3.7 Blod og urinanalyse.

Elementer af rødt blod, som regel, ændrer sig lidt med tuberkulose. Først efter akutt tab af blod fra lungerne eller tarmene kan anæmi overholdes. Et svagt fald i hæmoglobin kan ses i kroniske former for fibro-cavernøs lungtubberkulose. En af indikatorerne for tuberkuløs aktivitet er ESR (erythrocytsedimenteringshastighed). Accelereret ESR korrelerer ikke kun med aktiviteten og omfanget af den nuværende friske proces, men også med forværringen af ​​kroniske, især fibro-cavernøse processer. Elementer af leukocytfraktionen af ​​blodet reagerer mere aktivt på den tuberkuløse proces.

Konventionelt er der tre faser af ændringer i leukocytfraktionen af ​​blod forbundet med arten af ​​læsioner i lungetuberkulose:

  1. Neutrofile - Kampens fase. I blodet øges andelen af ​​neutrofiler, som følge heraf er der et skifte i blodformlen til venstre. Eosinofiler er fraværende, antallet af lymfocytter og monocytter er reduceret. Lymfopeni er karakteristisk for progressive former for tuberkulose.
  2. Monocytfase - overvinde infektion. I blodet øges antallet af lymfocytter, blodformlen forskydes til venstre, antallet af neutrofiler reduceres, enkelt eosinofiler detekteres.
  3. Recovery fase Andelen lymfocytter og eosinofiler øges. Blodtællinger normaliseres gradvist.

En sådan opdeling i faser afspejler kun generelle blodreaktioner, som ikke afspejler hele kompleksiteten af ​​blodreaktioner mod kronisk tuberkuloseinfektion.

Nuklear neutrofile skift i tuberkulose.
Foruden kvantitative har gruppen af ​​neutrofiler en kvalitativ egenskab, som er meget tyndere og tidligere angiver en række patologiske processer. Voksen tuberkulose, som regel post-primær proces, forårsager oftest kun en stigning i stabile neutrofiler i blodet. Med udpræget infiltrative-pneumoniske former og med fænomenet lungevævsintegration afsløres skiftet af neutrofiler til venstre helt klart og kan nå op til 20-30% af stablen.

Pulmonal infiltration uden opløsning og fokale former for tuberkulose i perioden med deres første påvisning eller eksacerbation ved subfebril temperatur og lavfunktionelle funktionsforstyrrelser giver et mindre markant skift. På samme tid kan de resterende elementer i hemogrammet være fuldstændig blottet for abnormiteter. Derfor får en grundig definition af et nukleart skift diagnostisk værdi i tuberkulose.
Undersøgelsen af ​​det neutrofile nukleare skift blev fremskaffet af Arneth (Arneth) baseret på en undersøgelse af blod i forskellige infektioner og især i tuberkulose. Ved at lave komplekse beregninger med mange skitser bemærkede Arneth en vis regelmæssighed i konfigurationen af ​​neutrofile kerner. I blodet af en sund person er neutrofiler med ufortyndede bannere, ikke-segmenterede kerner (klasse I) 5%; neutrofiler med to segmenter forbundet med filiform indsnævring (klasse II) - 35%, klasse III - 41%, klasse IV - 17% og klasse V - 2%. I infektioner i forhold til deres sværhedsgrad falder antallet af mange segmenterede former, antallet af små segmenterede (2-3 segmenter) og usegmenterede vokser. I Arneth-ordningen er antallet af usegmenterede neutrofiler skrevet til venstre; til højre er antallet af celler i klasse II, derefter klasse III osv. Som følge heraf øges antallet af celler i venstre side af kredsløbet med en stigning i ikke-segmenterede og mindre segmenterede former, og der sker en "venstre skift".

Tegn på en tuberkuløs proces, udover ændringer i hæmogrammet, er hyponatremi. Det er det mest karakteristiske metaboliske skifte. Årsagen til hyponatremi er udviklingen af ​​et antidiuretisk hormonsubstans påvirket af pulmonalt tuberkulose. Særligt intensivt produceres dette stof i perioden med almindelige tilfælde-destruktiv former.

Urinanalyse
Urin udskillelse hos tuberkulose patienter er næsten normal. Patologiske ændringer i urinen kan være i nederlag af tuberkulose i nyrerne eller urinvejen. Proteiner, leukocytter, MBT detekteres i urinen. Hos patienter med kronisk tuberkulose i lungerne eller knoglerne kan tegn på amyloidose detekteres (resistent pururia, brutto hæmaturi).

Diagnose af tuberkulose i analysen af ​​blod og urin

Elementer af rødt blod, som regel, ændrer sig lidt med tuberkulose. Først efter akutt tab af blod fra lungerne eller tarmene kan anæmi overholdes. Et svagt fald i hæmoglobin kan ses i kroniske former for fibroa, cavernøs lungtubberkulose.

En af indikatorerne for aktiviteten af ​​den tuberkuløse proces er ESR (erythrocytsedimenteringshastighed). Accelereret ESR korrelerer ikke kun med aktiviteten og omfanget af den nuværende friske proces, men også med forværringen af ​​kroniske, især fibrokologiske processer.

Elementer af leukocytfraktionen af ​​blodet reagerer mere aktivt på den tuberkuløse proces.

Konventionelt er der tre faser af ændringer i leukocytfraktionen af ​​blod forbundet med arten af ​​læsioner i lungetuberkulose.

  1. Neutrofile fase af kamp. I blodet øges andelen af ​​neutrofiler, hvilket resulterer i et skifte af formlen til venstre. Eosinofiler er fraværende, antallet af lymfocytter og monocytter er reduceret.
  2. Monocytfase - overvinde infektion. I blodet øges antallet af lymfocytter, blodformlen forskydes til venstre, antallet af neutrofiler reduceres, enkelt eosinofiler detekteres.
  3. Recovery fase Andelen lymfocytter og eosinofiler øges. Blodtællinger normaliseres gradvist.

Denne adskillelse i faser reflekterer kun den samlede blodreaktion.

Nuklear neutrofile skift i tuberkulose

Foruden kvantitative har gruppen af ​​neutrofiler en kvalitativ egenskab, som er meget tyndere og tidligere angiver en række patologiske processer.

Voksen tuberkulose er normalt en sekundær proces, oftest forårsager det kun en stigning i stabile neutrofiler i blodet. Med udpræget infiltrative-pneumoniske former og fænomener af lungevævsintegration afsløres forskydningen af ​​neutrofiler til venstre helt klart og kan nå op til 20-30% af båndkernen.

Det pulmonale infiltrat desintegreres ikke, og fokale former for tuberkulose i perioden med deres første detektion eller eksacerbation ved subfebril temperatur og lavtliggende funktionelle lidelser giver et mindre markant skift. Imidlertid kan de resterende elementer i hemogrammet muligvis ikke opdage abnormiteter overhovedet. Derfor får en grundig definition af atomforskydningen særlig betydning for tuberkulose.

Læren om neutrofile atomforskydning blev fremskyndet af Arnet (1905) baseret på en undersøgelse af blod i forskellige infektioner, herunder tuberkulose.

Ved at lave komplekse beregninger med mange skitser bemærkede Arneth en vis regelmæssighed i konfigurationen af ​​neutrofile kerner. En sund persons blod indeholder:

  • 5% neutrofiler med ufortyndede wafers, ikke-segmenterede kerner (klasse I);
  • 35% neutrofiler med to segmenter forbundet med trådlignende sammenbrud (klasse II);
  • 41% af neutrofiler med tre segmenter (klasse III);
  • 17% neutrofiler med fire segmenter (klasse IV);
  • 2% neutrofiler med fem segmenter (V klasse).

Ud over segmenteringen af ​​kernen tog Arnet hensyn til dens form. Således forklædte han adskillige underklasser efter graden af ​​depression af den ikke-segmenterede kerne. De resterende klasser er opdelt i underklasser afhængigt af formen af ​​segmenterne.

I infektioner, i forhold til deres sværhedsgraden, falder antallet af multi-segmenterede former, antallet af lavsegmenterede (2-3 segmenter) og ikke-segmenterede (der er relativt unge celler) forøges. I Arneth-ordningen er antallet af ikke-segmenterede klasse I neutrofiler vist til venstre; til højre er antallet af klasse II-celler placeret, derefter klasse III osv. Som følge heraf øges antallet af celler i venstre side af kredsløbet med en stigning i ikke-segmenterede og lavsegmenterede former, og der er et "venstre skifte".

Urinanalyse

Urin udskillelse hos tuberkulose patienter er næsten normal. Patologiske ændringer i urinen kan være i nederlag af tuberkulose i nyrerne eller urinvejen.

Hos patienter med kroniske former for lungetuberkulose kan tegn på amyloidose detekteres.

35. Diagnostisk værdi af blod- og urintest hos patienter med tuberkulose.

Blodtest Hæmoglobin og røde blodlegemer forbliver i de fleste tilfælde uændrede med undtagelse af tilfælde ledsaget af akutt blodtab. En indikator, der angiver tilstedeværelsen af ​​en aktiv tuberkuløs proces, er erythrocytsedimenteringshastigheden. Accelereret ESR er karakteristisk ikke kun for frisk aktiv tuberkulose, men også for forværring af den kroniske proces. De resterende indikatorer for blodprøven varierer meget afhængigt af arten af ​​lungeskaden. Ændringer i de perifere indikatorer. blod når tuberk. Ingen specifikitet, men hemogram hjælper med at diagnosticere. tuberk fase. behandle og vurdere byrden. hans strømning. Personer undersøgt for tuberkulose og patienter med tuberkulose. tildelt den fælles kile. blodprøve med definitionen af ​​ESR, indhold eritr. og leukotomer., koncentration af hæmoglob og beregning af leukocytformel. Patienter med tuberkulose i nærvær af pyæmi anbefales. bestemme antallet af reticulocytter til vurdering af regenerering. knoglemarvs evner i forskellige diagnostiske tilfælde - blodpladetal. Hæmatolog ændrer sig indikatorer afhænger på den ene side af lokalisering, art og sværhedsgrad af inf. behandle på den anden side - fra kroppens tilstand, dens kompensationsreserver. Hemogram har. snarere en fase af processen end dens kile. forme. For eksempel hos patienter med fælles destruktive former for tuberkulose med kompensationsproces og fravær af frisk inflammation. Ændringer i blodbillede kan være normale. Skarphedsrør. processen ledsages normalt af et neutrofilt stabschift, lymfopeni og en stigning i ESR. Tot. indholdet af leukocytter na. de fleste patienter i det normale område. Kun det akutte og svære kursus karakteriseres af en forøgelse af indholdet af leukocytter i blodet til 15 x 109 / l. Det neutrofile skifte af leukocytformlen til venstre på samme tid bliver mere signifikant. I alvorlige tilfælde af sygdommen (især i miliær tuberkulose) kan en leukemoidreaktion af myeloid typen forekomme. Aflastningen af ​​den akutte proces medfører normalisering af disse ændringer, udseendet af lymfocytose. Neutropeni og lymfocytose kan observeres ved kronisk hæmatogen dissemineret og fokal tuberkulose.

Urinanalyse I analysen af ​​urin hos en patient med lungetuberkulose er der ingen mærkbare afvigelser fra normen. Ændringer forekommer kun i tuberkuløse læsioner af nyrerne og urinvejen. Rutinemæssig urinalyse for tuberkulose er ikke kun nødvendig, hvis der er mistanke om nyrebeskadigelse. I den sidste tilfælde er han en. til tidlig diagnose. Den vedvarende tilstedeværelse af pus i urinen, og vigtigst af alt, tuba. bakterier, naturligvis peger på karret. nyrerne. Men nogle gange er det nødvendigt at gentage. Issled. urin til at opdage patologen. fund; så med nogle. former for tuberkulose månedlig urintest (dissemineret form, kompliceret primærkompleks). Små ændringer i urinen i form af spor af protein, single. leukocytter og friske erythrocytter kan med jævne mellemrum opdages som fænomener af generel forgiftning. Endelig giver nogle reaktioner med urin tegn på sværhedsgraden af ​​processen. Blandt dem er udseendet af diazo-reaktion under generalisering. former for tuberkulose, især med miliær tuberkulose.

Utvivlsomt har prognostisk værdi i løbet af tuberkulose urokromogen opløsning. Det er meget enkelt, og det er dets store fordel. Hun er fremstillet. mark. måde: Tag filtreret urin og fortynd det 10 gange. Hæld i to rør, en betjening som en kontrol, og en opløsning af kaliumpermanganat 1: 1000 tilsættes til den anden. En positiv reaktion i røret resulterer i en skarpe kanariefarvning, som meget tydeligt ses i sammenligning med kontrollen. Det er kun nødvendigt at tage højde for kun godt udtrykt. farve. Reaktionsmekanismen er, at kaliumpermanganat oxiderer farveløst urokromogen i urinen, hvilket er signifikant forhøjet i tilfælde af progressiv tuberkulose.

Hvad er testen for lungebetændelse?

Laboratorieundersøgelser passerer alle patienter. Da patologi er smitsom over for andre, bidrager rettidig undersøgelse af biologisk materiale til nøjagtigheden ved diagnosen og hjælper med at kontrollere behandlingsforløbet.

Liste over laboratorieundersøgelser for pulmonal tuberkulose

Liste over tests for tuberkulose

Listen over obligatoriske tests for lungtubberkulose er som følger:

  • sputumundersøgelse - i nærværelse af hulrum findes rislegemer, protein, elastiske fibre, calciumsalte i den;
  • exudatanalyse - viser neutrofiler og endotelceller med en dominans af leukocytter;
  • analyse af bronchoalveolar lavage viser et reduceret antal alveolære makrofager med en kraftig stigning i neutrofiler med et aktivt forløb af tuberkuloseprocessen, og med et inaktivt forløb af indikatorer for makrofager steg lidt;
  • serologiske analyser eller enzymimmunoassays testes til bestemmelse af serumimmunoglobuliner for mycobakterielle antigener. Forholdet mellem det diagnostiske antistof-titer og sygdomsfremkaldende middel overstiger værdien 1: 8.

Hvad viser blodprøveresultaterne?

På grund af den biokemiske analyse af blod i lungetuberkulose har specialister evnen til at bestemme retningen af ​​ændringer i protein og dets fraktioner i blodserum. Dette bestemmer sygdommens form og stadium. Uronsyre, kobber, kolesterol og lysozymniveauer overskrides. Kreatinekinase og angiotensinomdannende enzymaktivitet observeres. Respiratorisk acidose udvikler sig på grund af et fald i pH og en stigning i pCO2.

Med hensyn til hæmoglobin er deres reduktion, der fører til udviklingen af ​​anæmi, ikke typisk for tuberkuloseprocessen.

Urinalyse hos tuberkulose patienter

Gør urinprøver for lungetuberkulose?

Urinudskillelse hos tuberkuløse patienter forbliver normal. Patologiske ændringer sker normalt, hvis nyren og urinvejen er involveret i tuberkuløs proces. Hos patienter med kronisk sygdom kan tegn på amyloidose detekteres i løbet af undersøgelsen.

Hvad betyder analysen af ​​urin for lungtubberkulose, hvilke oplysninger kan indikere udviklingen i den patologiske proces?

  1. Tætheden er 1,015 - 1,025.
  2. Enhver tilstedeværelse af erythrocytter er tilladt, hos børn - ikke mere end 5.
  3. Hvide blodlegemer må ikke være mere end 2 enheder, for kvinder og piger - op til 5 enheder.
  4. Saltværdier bør ikke være signifikante.
  5. Den tilladte værdi af flade epitel er op til 5 enheder.

Hvad vil blodprøven for lungetuberkulose

Tuberkulose er en farlig og vanskelig sygdom at behandle. Effektiviteten af ​​behandlingen afhænger af, hvor hurtigt det blev påvist. Ingen er forsikret mod infektion, absolut kan alle blive syge - voksne, børn, ældre.

I mangel af den nødvendige rettidig behandling bliver den lukkede form til en farlig åben en, derfor er diagnosen i de tidlige stadier af sygdommen ekstremt vigtig, og dette kan opnås ved regelmæssige og omfattende undersøgelser.

I denne artikel vil vi se på forskellige metoder til diagnosticering af denne lungesygdom, og også prøve at bestemme hvilken blodprøve for lungtubberkulose der er mest pålidelig og informativ.

Når det bliver nødvendigt at kontrollere for tuberkulose

Så undersøgelsen er nødvendig for:

  • kontakt med bærere af sygdommen
  • generel svaghed
  • vægttab
  • temperaturstigning om aftenen;
  • kronisk hoste.

Det er især vigtigt at bestemme i tide forekomsten af ​​tuberkulose i barndommen, da det er meget sandsynligt hos børn, at infektionen vil forårsage yderligere patologiske processer i kroppen.

Det er vigtigt! En af de forebyggende foranstaltninger er en BCG-vaccination den 4. dag i et barns liv og 7 år. Barnets krop er svagere end en voksen, så det er vigtigt at beskytte det mod infektion og lægge vaccinationer ned.

Forskning for mistænkt tuberkulose

Tuberkulose kan påvises på flere måder.


Foto 1. Fragment af røntgen på brystet hos en patient med tuberkulose. Fluorografi er en af ​​de mest pålidelige metoder til diagnosticering af denne sygdom, men er mest effektiv i kombination med andre. For eksempel vil en detaljeret blodprøve vise tuberkulose selv i et tidligt stadium.

  1. Røntgenundersøgelse. Fluorografi hjælper med at evaluere graden af ​​lungeskader. Det skal imidlertid tages i betragtning, at røntgenbilledet ikke viser de indledende stadier af sygdommen. Undersøgelsen skal være omfattende. For en mere fuldstændig undersøgelse skal patientens lunger fotograferes både fra forsiden og fra bagsiden.
  2. Tuberkulinprøve. Ved undersøgelse af børn anvendes tuberkulinprøven oftest (Mantoux test). Tuberkulin er en blanding af proteiner isoleret fra døde patogener. Indførelsen af ​​lægemidlet under huden forårsager en reaktion af immunitet, som manifesterer sig på forskellige måder. Hvis der ikke er patogener i kroppen, så efter et par dage vil injektionen efterlade et næppe mærkbart mærke. Ved injektionsstedets inflammation eller dannelsen af ​​en abscess er sandsynligheden for infektion hos patienten høj.

Det er vigtigt! Mantoux-testen tillader ikke at bestemme forekomsten af ​​tuberkulose med en 100% sandsynlighed, men det vil bidrage til at bestemme risikogruppen for sygdommen. Med plejeundersøgelser skal der gøres til dem, der lider af allergi. Kroppen kan reagere på indførelsen af ​​sammensætningen på en uforudsigelig måde.

  1. Blodprøve Resultaterne hjælper med at registrere spor af patogenet. Udpeget til at identificere den endelige diagnose og omfanget af sygdommen.
  2. Mundens sammensætning. Tilstedeværelsen af ​​mycobacterium tuberculosis gør det muligt at identificere og studere sputum. Materialet er fundet overstige normen for proteinindikatorer, som adskiller det fra bronkialsputum såvel som smitsomme stoffer.

Er det muligt at bestemme tuberkulose ved en generel blodprøve?

Sammensætningen af ​​røde blodlegemer (røde celler) i nærvær af bakterier varierer lidt. Akutte tarm- eller lungeblødninger fremkalder anæmi, et signifikant fald i hæmoglobin.

Der er mennesker, der tvivler på, om det er muligt at bestemme tuberkulose ved en blodprøve. Faktisk er en generel analyse i stand til at identificere udviklingen af ​​inflammatoriske og patologiske processer i kroppen ifølge en øget indikator for ESR. Den øgede hastighed indikerer ikke kun aktiviteten og varigheden af ​​den nuværende inflammation, men også forværringen af ​​kronisk, især i sygdommens endelige faser.


Foto 2. Lægen udfører proceduren for indsamling af blod fra patientens ven med en sprøjte. Derefter udføres en blodprøve med tuberkulose, hvis indikatorer indikerer inflammatoriske processer.

Det er vigtigt! ESR-niveauer kan forveksles med indikatorer for inflammation eller lungekræft. I dette tilfælde er det nødvendigt at undersøge antallet af eosinofiler (en af ​​de hvide blodlegemer). Hvis eosinofiler udvides, og leukocytformlen viser dramatiske ændringer i blodprøven, sker dette med tuberkulose og udelukkes med lungebetændelse.

Er kliniske og biokemiske blodprøver nøjagtige?

En blodprøve for lungetuberkulose er ofte utilstrækkelig til at diagnosticere en tuberkelbacillus. Derefter er yderligere omfattende undersøgelse nødvendig. Det samme kan siges om biokemisk analyse af blod. I tilfælde af en indledende fase af tuberkulose eller latent form vil det højst sandsynligt ikke vise nogen abnormiteter. Og kun i akutte former for sygdommen vil albumin-globulinkoefficienten i den blive sænket.

Typer af blodprøver for antistoffer mod tuberkulose

Der er mere præcise, dybtgående end OAK, metoder til blodprøvning, som gør det muligt at opdage tuberkulose. Hvordan man kan bestemme fra sådanne blodprøver, hvis du har en sygdom, skal du overveje det næste.

Etablering af en objektiv diagnose er mulig ved anvendelse af polymerasekædereaktionens (PCR) og enzymbundne immunosorbentanalyser (ELISA).

Angiv ELISA-metoden tilstedeværelsen af ​​tuberkulose

Ved hjælp af ELISA detekteres tilstedeværelsen af ​​patogene antistoffer i patienten. Metoden er praktisk, fordi den giver dig mulighed for samtidig at undersøge et stort antal prøver. Det har dog lav følsomhed og anbefales til brug i områder med lav incidens.

Hvilke ændringer viser PCR-metoden?

PCR-metoden er blandt de mest effektive. Det bruges til at identificere sygdommen, bestemme sværhedsgraden og remissionen under behandling ved at finde DNA'et af mikrobakterier.

PCR bruges til:

  • påvisning af Kochs progressive stav
  • test for påvisning af ekstrapulmonal tuberkulose
  • hurtig etablering af foci til lokalisering af infektion;
  • diagnose af sygdomsgenoptagelse
  • overvågning af behandlingsforløbet.

Både han og andre blodprøver for antistoffer mod tuberkulose anses for at være ret pålidelige. Men der er andre.

Alternative blodprøvningsmetoder

Interferon Gamma Release Assays er mindre almindeligt end PCR og ELISA til påvisning af patogene mikrobakterier. Det kan udføres i stedet for tuberkulinprøve. Reaktionen indikerer dannelsen af ​​gamma interferon som reaktion på indførelsen af ​​mikrobakterier. Resultaterne kan nøjagtigt bestemme forekomsten af ​​infektion.

En anden alternativ forskningsmetode er QuantiFERON-TB Gold. Denne metode bruges oftest til at teste børn, der har en stærk allergisk reaktion på tuberkulinprøven.

Det er vigtigt! Begge metoder tillader ikke at bestemme infektionsgraden - aktiv eller latent.

Den behandlende læge bestemmer hvilken type blodprøve der skal anvendes. Ofte udføres undersøgelsen i et kompleks. En blodprøve for latent tuberkulose må muligvis ikke give resultater.

Hvordan er indikatorerne for blodprøver

Ved fortolkning af en generel blodprøve skal der tages hensyn til niveauet af ESR, hæmoglobin, leukocytter.

Niveauet af ESR i en sundt person vil være mindre end 50 enheder, overskuddet af denne indikator indikerer den inflammatoriske proces i kroppen.

Antallet af leukocytter i blodet hos en patient med tuberkulose når 6 til 10 9 / l i akutte og alvorlige tilfælde af sygdommens udvikling - 12-15 til 10 9 / l.

Sammensætningen af ​​røde blodlegemer hos de fleste patienter forbliver normalt. Lavt hæmoglobin registreres i miliær tuberkulose, tilfældeøs lungebetændelse.

Akutte, progressive og komplicerede sygdomsformer ændrer leukogrammet. I nogle tilfælde opdages moderat leukocytose (op til 10.000-15.000 leukocytter), mindre almindelig leukopeni.

Uanset hvad du gør en blodprøve for lungetuberkulose, dechifterer dem, er erfarne fagfolk. Kun de kan præcist bestemme, hvordan tuberkulose kører, hvis det stadig er detekteret. Analyser af ELISA og PCR afkodes det samme. På særlige former er et negativt eller positivt resultat angivet modsat den udpegede infektion.

Typer af test til behandling

Behandlingsproblemet ligger i, at infektionen kan blive resistent over for enhver form for antibiotika, især i fremskredne stadier, samt en lang inkubationsperiode, hvor det ikke er muligt at bestemme infektionen.

Efter identifikation og ordinering af den passende behandling overvåges helingsprocessen med intervaller på 1-2 gange pr. Måned. Patienten giver blod og slim.


Foto 3. Medicinsk bord på lægens kontor efter patientens sputum samles. Sputumprøver er lukket i plastrør og venter på laboratorietest.

Du kan tage et komplet blodtal, en Mantoux-test, og du kan gennemgå fluorografi på næsten ethvert lægecenter. Dette sker straks, hvis der opstår en mistanke. Baseret på de opnåede data vil terapeuten konkludere om fraværet af patologiske forandringer i kroppen eller vil udstede en henvisning til yderligere undersøgelse i en tubdispenser.

Specialiserede og mere præcise undersøgelser udføres i TB dispensaries, som er udstyret med laboratorier og de nødvendige reagenser til forskning.

Så opsummerer ovenstående:

  • tuberkulose er en farlig sygdom, der er ekstremt vigtigt at registrere i tide;
  • øget ESR, mørkere i lungerne, ændringer i leukogram giver grundlag for at sende patienten til yderligere undersøgelse for påvisning af infektion;
  • behandling udføres ved hjælp af anti-TB-lægemidler; Den intensive fase af behandlingen fortsætter, indtil der opnås positive kliniske og radiologiske indikatorer.

Nyttig video

Vi tilbyder at se en video, som også besvarer spørgsmålet om, hvorvidt det er muligt at opdage tuberkulose ved en blodprøve. Den beskriver mere detaljeret om QuantiFERON TB Gold quantiferon test, som i analysen af ​​blod tuberkulose ved immunresponset.

Dekryptere et komplet blodtal for tuberkulose hos voksne og børn

Infektion med tuberkelbacillus er ikke længere en sætning for en person. Moderne medicin bruger effektive redskaber til bekæmpelse af denne sygdom, hvis den påvises tidligt. Regelmæssige forebyggende undersøgelser og test, herunder en generel blodprøve for tuberkulose, hjælper med at opdage patologi i tide.

Ændringer i det kliniske billede

Komplet blodtal for lungtubberkulose (UAC) har ingen specifikke manifestationer. Der er ingen markører, der taler om udviklingen af ​​tuberkulose og bestemmelse af sygdomsfasen. Men ved ikke-specifikke tegn kan man dømme om den latente inflammatoriske proces og mistænker ændringer i lungerne.

Afvigelse af røde blodlegemer fra normen

Med en træg form eller lokaliseret læsion ændrer antallet af erytrocytter i blodet ikke, men deres farve ændres. Hæmoglobinniveauet i erythrocyten er reduceret. Denne tilstand kaldes hypokromi.

Med signifikante infiltrative læsioner af lungevævet viser en klinisk blodprøve en reduktion af antallet af røde blodlegemer, et fald i deres størrelse. Ældre celler forekommer - reticulocytter, som er "forstadier" af røde blodlegemer. I begyndelsen af ​​tuberkulose overstiger antallet af reticulocytter ikke over 0,5%.

Alvorlig anæmi er mere almindelig hos voksne med avanceret tuberkulose. Samtidig øges antallet af reticulocytter til 1% af det totale antal røde blodlegemer.

Leukocyt Skift

Leukocytter som celler i immunsystemet anvendes som reaktion på sygdommen i første omgang. Ifølge en generel blodprøve og et leukogramstudie bestemmes både tilstedeværelsen af ​​den inflammatoriske proces og dets stadium.

I den ukomplicerede lukkede form er der en signifikant stigning i antallet af neutrofiler - hvide blodlegemer, der er ansvarlige for bekæmpelsen af ​​bakteriel infektion. Promyelocytter forekommer - umodne leukocytceller, som normalt ikke forekommer.

Lang, hårdflydende, pulmonal tuberkulose ledsages af degenerative ændringer i neutrofiler, dannelsen af ​​patologisk granularitet. Antallet af eosinofiler falder kraftigt. Der er lymfopeni - en reduktion i antallet af lymfocytter. Alle disse tegn indikerer en langvarig inflammatorisk proces, ledsaget af dannelsen af ​​pus og nekrotiske masser.

ESR ændring

Bestemmelse af tuberkulose i sin aktive fase hjælper ESR - en indikator for erythrocytsedimenteringshastigheden. Akkumuleringen af ​​immunglobuliner, fibrinogen, bidrager til udfældningen af ​​røde celler og deres hurtige nedbør. Normalt er disse blodparametre hos mænd ikke højere end 10 mm / h, hos kvinder - 15 mm / h. Acceleration af ESR op til 80 mm / h indikerer aktivering af den inflammatoriske proces i kroppen.

Funktionsindikatorer hos børn

En blodprøve for tuberkulose hos et barn er ikke meget forskellig fra ændringer hos en voksen. Afkodning af resultatet udføres på de samme indikatorer:

  • I den indledende fase af sygdommen ændres erytrocytformlen lidt. Anæmi kan kun forekomme i en destruktiv form. I andre tilfælde forbliver antallet af røde blodlegemer uændret, mens andelen af ​​umodne erytrocytter øges. Tuberkulose hos børn kan mistænkes, når reticulocytter opdages over 1 ppm.
  • Leukocytindikatorer undergår også ændringer. Leukocytose udvikler sig - en stigning i det totale antal hvide blodlegemer på grund af neutrofiler, og antallet af lymfocytter falder kraftigt. Ved normen for børn over 6 år gamle 40% er antallet af lymfocytter i tuberkulose ikke mere end 20%.

I de tidlige stadier af sygdommen vokser antallet af eosinofiler - celler der reagerer på en allergisk reaktion. Et markant fald i dem viser, at processen går ind i den aktive fase.

  • Hos børn er ESR ikke større end 10mm / h. Acceleration til 50mm / h indikerer mobilisering af kroppens forsvar for at bekæmpe inflammatorisk proces.

I et barn opstår sygdommens indledende fase ofte uden tydelige symptomer eller er maskeret af ARVI.

Ændringer afhængigt af sygdomsstadiet

Er det muligt pålideligt at fastslå tilstedeværelsen af ​​tuberkuløst fokus ved hjælp af laboratorieblodprøver? Desværre ikke. Komplet blodtal for tuberkulose er kun i stand til at detektere den inflammatoriske proces kun i bestemte stadier af sygdommen.

  1. I infiltrationsfasen reagerer leukocytter lidt, og ESR forøges.
  2. I nedbrydningsfasen optræder udtalt ændringer i leukocytformel og erytrocytter.
  3. Den formidlede form under analysen vil give mere udtalte ovennævnte afvigelser.
  4. Når den inflammatoriske proces aftager eller genopretningsprocessen vender det røde blod tilbage til det normale, genoprettes antallet og forholdet mellem leukocytter.
  5. En inaktiv form for pulmonal tuberkulose detekteres ikke ved generel blodprøve.

Tidlig påvisning af tuberkulose er en forudsætning for en vellykket behandling, og et fuldstændigt blodtal er en metode, der muliggør detektering af latent inflammatorisk proces i tide. Og selv om analysen ikke betragtes som en specialiseret forskningsmetode, er det muligt at dække en stor masse mennesker på kort tid. I tilfælde af påvisning af abnormiteter i det karakteristiske kliniske billede er en specifik analyse af tuberkulose og fluorografi foreskrevet.

Hvem sagde, at det er umuligt at helbrede tuberkulose?

Du er blevet diagnosticeret med tuberkulose. Du opfylder alle lægens recept, men der er ikke noget opsving. En håndfuld piller gør ondt i maven, forfølger svaghed og apati? Måske bør du ændre tilgangen til behandling.

Læger kan ikke overvinde årsagen til din sygdom. Læs historien om Helen, som formåede at besejre tuberkulose uanset hvad. Læs artiklen >>

Indikatorer for ESR i tuberkulose

I øjeblikket er tuberkulose ifølge den statistik den mest almindelige sygdom blandt mennesker. Denne sygdom rammer oftest børn og fattige. Det er værd at bemærke, at antallet af syge mennesker fordobles hvert år. I den forbindelse udvikles nye lægemidler og metoder til behandling af tuberkulose.

Den væsentligste faktor, der bidrager til udviklingen af ​​tuberkulose, er et fald i immuniteten, som kan skyldes miljøforurening. Det er muligt at diagnosticere denne sygdom ved hjælp af tests og på mange andre måder.

En blodprøve for tuberkulose er den vigtigste indikator for at bestemme sygdommen hos mennesker. Tuberkulose er en farlig smitsom sygdom. Det er værd at bemærke, at i den mere avancerede fase af sygdommen er meget vanskeligt at behandle, så det er meget vigtigt at lægge mærke til sygdommen i tide og begynde korrekt behandling på hospitalet.

Måder at indgå i tuberkulose

Sygdommen har en luftbåren transmissionsmekanisme. Infektion kan således forekomme som følge af indgangen af ​​patogenet ind i kroppen gennem slimhinden. Desuden kan tuberkulose overføres fra en syg mor til et udviklingsfoster.

I næsten alle tilfælde påvirker tuberkulose åndedrætssystemet. Adskil den ekstrapulmonale form af sygdommen (påvirker fordøjelsessystemet, centralnervesystemet, forstyrrer den visuelle funktion, leddene, det urogenitale system).

Den vigtigste kilde til sygdommen er mycobacterium - Kochs stav. Det påvirker lungerne, huden, knoglerne og mange andre organer. Typisk kan tuberkulose føre til handicap eller endog døden. Men hvis sygdommen diagnosticeres så tidligt som muligt, så er det ganske godt behandles.

Indikatorer for ESR i tuberkulose

En blodprøve til bestemmelse af tuberkulose viser det kliniske forløb af den inflammatoriske proces. Normalt er erythrocytsedimenteringshastigheden: hos mænd, 1-10 mm / h, hos kvinder, 2-15 mm / h.

Patogenet, der kommer ind i menneskekroppen, forårsager skade på væv og organer i forskellige systemer. Herunder ændringer i blodtællinger. Så når smittet med en pind, er der en meget stærk stigning i erythrocytsedimenteringshastigheden. Antallet af leukocytter øges også, da kroppen har en inflammatorisk proces.
Tuberkulose forårsager som regel ingen signifikante ændringer i røde blodlegemer. Udviklingen af ​​en lille anæmi og lavt hæmoglobin kan kun udvikles med signifikant blodtab. Tuberkulose ledsages derfor af et overskud af ESR, der er betydeligt højere end den normale værdi.

symptomer

De vigtigste symptomer på tuberkulose omfatter:

  1. Forhøjet kropstemperatur;
  2. Nat sved;
  3. Udseendet af åndenød;
  4. Tør, stærk hoste med sputum (blodstrimler kan være til stede);
  5. Generel træthed
  6. Dramatisk vægttab
  7. Hurtig træthed;
  8. sløvhed;
  9. aggressivitet;
  10. Mangel på appetit
  11. Brystsmerter.

Børn, i modsætning til voksne, er mest modtagelige for tuberkulose. Derfor er det nødvendigt at regelmæssigt undersøge dit barn og foretage en test for at identificere Kochs pinde. Tidlig diagnose giver dig mulighed for at opnå et positivt resultat uden alvorlige konsekvenser.

Nogle mennesker har et stærkt immunforsvar. I dette tilfælde begynder symptomerne på sygdommen først at forekomme i de senere stadier. Når immuniteten svækkes, forekommer symptomer i starten af ​​sygdommen.
Tuberkulose udvikler langsomt og gradvist:

  • Primær form.
    Udvikler umiddelbart efter infektion. De vigtigste symptomer på dette stadium er hævede lymfeknuder.
  • Latent (latent form).
    Sygdommens begyndelse er karakteriseret ved manglende symptomer. Desuden fremstår de i form af specifik smerte ved vejrtrækning og hoste, mangel på appetit, øget svedtendens og hurtig træthed. Denne formular kan betragtes som ikke smitsom.
  • Åben formular.
    Den mest alvorlige form af sygdommen. Til behandling er det nødvendigt at beskytte den syge fra andre i lukkede medicinske institutioner. Dette er for at sikre sikkerheden for befolkningen omkring dem.
  • Sekundær form.
    Observeret som følge af reinfektion.

Diagnose af tuberkulose

Påvisning af sygdommen er kompliceret af lighed mellem de første symptomer med kronisk bronkitis. Den ledende rolle i diagnosen tuberkulose er rettidig udtagelse af test fra potentielle patienter. Så hvis en patient mistænkes for tuberkulose, udføres sputumforskning. For at gøre dette samles sputum i løbet af dagen og sendes til et laboratorium for at detektere mykobakterier.

Det skal bemærkes, at diagnosen tuberkulose har andre metoder til undersøgelse af patienter.

De mest effektive måder at diagnosticere sygdommen på er:

  1. B / x blodprøve;
  2. Urinanalyse;
  3. Sputumanalyse;
  4. Mantoux test, Pirque;
  5. CT (computertomografi);
  6. Serologiske blodprøver (ELISA, PCR);
  7. bronkoskopi;
  8. biopsi;
  9. Pleural punktering
  10. røntgenbillede af brystkassen;
  11. Fluoroskopi.

Det er værd at bemærke, at tuberkulose ledsages af en stigning i koncentrationen af ​​kolesterol, lysozym, urinsyre og Cu i blodserum. Baseret på dette kan alle ændringer i tuberkulose være meget specifikke.

Hver form for sygdommen adskiller sig selvfølgelig, sværhedsgrad, diagnose og behandling. Derfor, når de første symptomer vises, skal du straks kontakte en læge og ikke selvmedicinere. Da du kun kan forværre situationen og forværre din tilstand.

I øjeblikket er der mange stoffer, der effektivt bekæmper tuberkulosens forårsagende middel. Den ledende rolle i genopretning af en person er spillet ved rettidig diagnose og kompetent terapi. Også den generelle tilstand af patienten afhænger af genoprettelsesprocessen efter sygdommen. Således, hvis du overholder alle medicinske anbefalinger, kan du reducere risikoen for geninfektion.

Laboratoriediagnose af tuberkulose

Tuberkulose er en sygdom, der er let at diagnosticere under aktuelle forhold og videnskabelige resultater. Laboratoriediagnosticering af tuberkulose er central blandt andre diagnostiske metoder, og kun for røntgenundersøgelsesmetoder.

Komplet optælling blod

Hos patienter med tuberkulose er ændringer i den generelle blodprøve ikke patognomoniske. Med begrænsede og inaktive former for tuberkulose er hypokromi af erytrocytter typisk for deres normale antal. Ved massiv infiltration eller caseøs lungebetændelse, med udbredt caseøs lymfadenitis, specifik tarmskader, såvel som med stor lunge- eller postoperativ blødning, erythropeni og mikrocytose, oligochromasi, polychromasi noteres. Makrocytose, og endnu mere poikilocytose er meget mindre almindeligt, normalt med alvorlig anæmi. Antallet reticulocytter med kompenseret stadium af tuberkulose varierer fra 0,1 til 0,6%, med subkompenseret - fra 0,6 til 1,0%, og 1% reticulocytter er karakteristiske for dekompenseret.

I tilfælde af tuberkulose kan moderat leukocytose (op til 15.000 leukocytter) i nogle tilfælde observeres, mindre ofte leukopeni, som findes i 2-7% af tilfældene hos patienter med begrænsede og let igangværende former for processen og hos 12,5% i destruktive og progressive lungetuberkulose.

Ofte forekommer skift i leukocytformlen. Både relativ og absolut neutrofili, moderat leukocytforskydning til venstre op til promyelocytter er noteret. Myelocytter forekommer meget sjældent i tilfælde af ukompliceret tuberkulose. Forøgelsen af ​​antallet af neutrofiler med patologisk granularitet i hemogrammet hos en patient med tuberkulose indikerer altid varigheden af ​​processen: hos patienter med svær tuberkulose indeholder næsten alle neutrofiler patologisk granularitet. Når et tuberkuløst udbrud falder, kommer atomforskydningen relativt hurtigt. Unormal granularitet af neutrofiler varer normalt længere end andre ændringer i hemogrammet.

Indholdet af eosinofiler i det perifere blod varierer også afhængigt af procesens fase og den allergiske tilstand i kroppen. Deres antal falder op til en aneosinofili under svære og langvarige udbrud af sygdommen og omvendt stiger med resorptionen af ​​infiltrater og pleural effusion såvel som med tidlige former for primær tuberkulose.

De fleste former for primær tuberkulose ledsages af lymfopeni, som undertiden observeres i en årrække, selv efter arvelige specifikke ændringer. Sekundær tuberkulose i den akutte fase afhænger af sværhedsgraden af ​​processen, kan ledsages af enten et normalt antal lymfocytter eller lymfopeni.

Blandt testene til vurdering af den tuberkuløse proces er et særligt sted besat ved bestemmelsen af ​​erythrocytsedimenteringshastigheden (ESR), som er vigtig for vurderingen af ​​tuberkuloseprocessen og identificeringen af ​​dens aktive former. En stigning i ESR indikerer tilstedeværelsen af ​​en patologisk proces (infektiøs-inflammatorisk, purulent, septisk, hæmoblastose, Hodgkins sygdom osv.) Og tjener som indikator for dets sværhedsgrad, men normale ESR-indikatorer indikerer ikke altid, at der ikke findes patologi. Erythrocytsedimentering accelereres af en stigning i blodniveauerne af globuliner, fibrinogen, cholesterol og et fald i blodviskositeten. Sænkning af erythrocytsedimentering er karakteristisk for forhold, der involverer hæmokoncentration, en forøgelse af indholdet af albumin og galdesyrer.

Hemogram hos patienter med tuberkulose ændres under behandlingen. Hæmatologiske ændringer forsvinder jo hurtigere, desto mere succesfulde terapeutiske indgreb. Imidlertid bør der tages hensyn til virkningen på hæmatopoiesis af forskellige antibakterielle lægemidler. De forårsager ofte eosinofili, i nogle tilfælde - leukocytose, og oftere leukopeni op til agranulocytose og lymfoidretikulær reaktion. Systematisk hæmatologisk kontrol og den korrekte analyse af de opnåede data er afgørende for vurderingen af ​​patientens kliniske tilstand, procesens dynamik og effektiviteten af ​​den anvendte behandling.

urinanalyse

Med urinstof-tuberkulose er urinprøve den vigtigste laboratoriediagnostiske metode. Du kan observere leukocyturi, erytrocyturi, proteinuri, hypoisostenuri, mycobacterium tuberkulose, uspecifik bakteriuri.

Leukocyturi er det mest almindelige symptom på tuberkulose i urinsystemet forud for specifik kemoterapi og er kun fraværende i undtagelsestilfælde, for eksempel med fuldstændig udslettelse af urinrummets lumen. Nechiporenko-testen (bestemmelse af antallet af leukocytter i 1 ml urin) hjælper med til mere objektivt at vurdere graden af ​​leukocyturi i nephrotuberculosis og i nogle tilfælde at identificere den ved normal urinalyse. Det skal dog tages i betragtning, at leukocytouri kan være i akut og kronisk pyelonefrit, cystitis, urethritis, sten i nyrerne og urinledere.

Eritrotsiturii. som leukocyturi. Det anses for at være et af de hyppigste laboratorie tegn på tuberkulose i det genitourinære system. Hyppigheden af ​​hæmaturi afhænger af prævalensen af ​​processen, den øges med udviklingen af ​​en destruktiv tuberkuløs proces i nyrerne. Erythrocyturi uden leukocyturi er mere karakteristisk for de tidlige stadier af nyretubberkulose. Hæmaturi, der hersker over leukocyturi, er et vigtigt argument til fordel for nyre-tuberkulose i dens differentiering med uspecifik pyelonefritis.

Biokemisk blodprøve

I tuberkulose afhænger ændringer i nogle biokemiske parametre primært af fase i processen, komplikationer og forskellige sygdomme forbundet med sygdommen. Hos patienter med inaktiv tuberkulose i lungerne og andre organer ændres de totale protein- og proteinfraktioner af blodserum ikke og bestemmer deres normale indhold.

I akutte former for sygdommen, såvel som i forværring og progression af kroniske former for tuberkulose, nedsættes albumin-globulinkoefficienten.

Vigtigt i vurderingen af ​​funktionstilstanden og organisk skade på leveren i tuberkulose og dens komplikationer er bestemmelsen i serum af direkte og totalt bilirubin, aspartataminotransferase (ACT), alaninaminotransferase (ALT). Dynamisk bestemmelse af niveauet af aminotransferaser. bilirubin til behandling af patienter med tuberkulose, især i dets alvorlige former, er en obligatorisk komponent i den biokemiske undersøgelse af patienter med tuberkulose og udføres hver måned.

Evaluering af nyrernes funktionelle tilstand indbefatter bestemmelsen af ​​serumkreatinin og beregningen af ​​den glomerulære filtreringshastighed ved anvendelse af Cockroft-Gault-formlen. Beregning af glomerulær filtreringshastighed ved brug af Reberg-testen giver mindre præcise resultater.

Hovedmålet med dynamiske biokemiske undersøgelser af patienter med tuberkulose er at styre procesforløbet, identificere bivirkninger af lægemidler rettidigt og passende korrektion af de resulterende lidelser i homeostasen.

Anvendelsen af ​​biokemiske forskningsmetoder til ekstrapulmonal tuberkulose

Den mest informative indikator overvejer indholdet af tuberculostearinsyre i biologiske væsker, men dets definition er fyldt med tekniske vanskeligheder (behovet for at anvende gaschromatografi og massespektrometri).

Det er lovende at måle aktiviteten af ​​adenosin deaminase, et enzym, som detekteres i væsker: synovial, perikardial, ascitisk eller cerebrospinal. De vigtigste producenter af adenosindeaminase er lymfocytter og monocytter. Bestemmelsen af ​​aktiviteten af ​​adenosin deaminase i biologiske væsker letter diagnosen tuberkulær synovitis, tuberkulose af lymfeknuder, tuberkuløs meningitis, tuberkulose serositis.

Nogle biokemiske parametre på grund af deres ikke-specificitet bestemmes kun i biologiske væsker tæt på læsionen. Indikatorniveauet måles som reaktion på subkutan eller intrakutan administration af tuberkulin (normalt før administration og 48 og 72 timer efter det). Herefter beregnes graden af ​​stigning i niveauet af markøren (i%) i forhold til startniveauet.

Optimal bestemmelse i urinen af ​​aktiviteten af ​​en organspecifik enzymtransamidinase, hvis forekomst er kendt med nyreskade af forskellig art. Undersøgelsen af ​​transaminidase er kun berettiget under betingelserne for subkutan administration af tuberkulin for at forværre den lokale inflammatoriske proces. Transamidinaseaktivitet i urinen bestemmes ved baseline og 24-72 timer efter administration af 50 TE af tuberkulin. En stigning i fermenturi med 2 gange og mere tillader i 82% af tilfældene at differentiere aktiv tuberkulose af nyrerne fra forværring af kronisk pyelonefritis.

Ved kvindelig genital tuberkulose bestemmes koncentrationerne af haptoglobin og malondialdehyd i blodet i den provokerende tuberkulinprøve. Tuberkulin administreres subkutant i en dosis på 50 TE, og efter 72 timer udføres en gentagen biokemisk undersøgelse. I tilfælde af tuberkuløs etiologi er graden af ​​stigning i niveauet af haptoglobin mindst 28% og niveauet af malondialdehyd - 39% eller mere. Bruges også til at bestemme aktiviteten af ​​adenosindeaminase i peritonealvæske afledt af Douglas-rummet. Punctatet undersøges igen 72 timer efter intradermal administration af tuberkulin i doser på 0,1 TE og 0,01 TE i projiceringsområdet af de indre kønsorganer på den forreste abdominalvæg. Til fordel for den tuberkuløse proces er en stigning i aktiviteten af ​​adenosindeaminase med 10% eller mere sammenlignet med den oprindelige en vejledende.

Med øjenskader undersøges en fokalreaktion, der forekommer i øjet som reaktion på antigenstimulering. Samtidig uønsket udvikling af et udtalt svar ledsaget af et fald i visuelle funktioner. Da vurderingen af ​​minimale fokalreaktioner ofte er vanskelig, at objektivere konklusionen, anbefales det at fokusere parallelt på graden af ​​stigning i serumhaptoglobin eller adenosindeaminase.

Alle biokemiske undersøgelser skal udføres sammen med andre metoder.

Blodkoagulationstest

Relevans af forskningen status blodstørkningssystemet TB er forårsaget af tilstedeværelsen af ​​en række patienter med lungetuberkulose hæmoptyse eller pulmonal blødning, samt hemocoagulation komplikationer i den kirurgiske behandling af tuberkulose. Desuden påvirker latent intravaskulær hæmokoagulering, som naturligvis er forbundet med tuberkulose, sygdomsforløbet og effektiviteten af ​​kemoterapi.

Hos patienter med lungetuberkulose med en overvejelse af den eksudative komponent af inflammation, observeres et fald i blodets antikoagulerende aktivitet. Hos patienter med lav forekomst af en specifik læsion i lungerne med en overvejelse af den produktive komponent af inflammation er intravaskulær hæmokoagulation ikke særlig udtalt. Hos patienter med lungetuberkulose med hæmoptyse og pulmonal blødning tilstand blodstørkningssystemet er anderledes: i patienter med tab lavt blod på højden gemoptoe eller umiddelbart efter afslutning der er en skarp stigning i blodets koagulation evne på grund af alvorlig intensivering af trombinoobrazovaniya samtidig opretholde forøget "strukturel" koagulation. Hos patienter med massivt blodtab observeres et fald i koagulationspotentialet som følge af et fald i fibrinogenkoncentration. aktivitet af faktor XIII, trombocytælling. På scenen for kirurgisk behandling hos patienter med begrænsede former for lungetuberkulose er der ingen signifikante sygdomme hos homeostasesystemet. Patienter med fælles processer, når de udfører pneumonim eller pleuropneumonektomi, udvikler ofte DIC, som kan have form af en "anden sygdom".

At overvåge tilstanden af ​​blodkoagulation i patienter med lungetuberkulose bør udføres bestemmelse af den aktiverede partielle tromboplastintid (aPTT), fibrinogen, thrombin tid, prothrombin indeks og blødningstid og koagulationstid.

Hormonale studier

Moderne eksperimentelle og kliniske observationer indikerer tilstedeværelsen af ​​ændringer i hormonal status af specifik lunge lungebetændelse. Det er bevist, at korrektionen af ​​dysfunktion af hypofyse-binyre, hypofyse-thyroid systemer og pankreatisk funktion i forbindelse med anti-TB terapi bidrage til aktivering af fibrogenese og reparation på et sted specifik inflammation.

Den funktionelle status af hypofyse-skjoldbruskkirtelsystemet vurderes ved indholdet i serum af triiodothyronin (T3) thyroxin (T4), thyreoideumstimulerende hormonhypofyse (TSH). Det er blevet fastslået, at subklinisk hypothyroidisme er påvist hos 38-45% af patienterne med lungetuberkulose, og det er oftest diagnosticeret i formidlede og fibrøse-cavernøse former af processen. Under disse samme former reduceres niveauerne som T mest drastisk.3,så og t4, og der kommer en ubalance af disse hormoner i form af at forøge forholdet T4/ Ts.

Funktionen af ​​binyrebarken vurderes ved niveauet af cortisol i blodserumet og den endokrine funktion af bugspytkirtlen ved koncentrationen af ​​immunreaktivt insulin. I den akutte fase af en smitsom sygdom øges behovet for endogent kortisol og insulin. Hyperinsulinæmi indikerer også insulinresistens for kropsvæv, hvilket er karakteristisk for enhver aktiv inflammatorisk proces, især specifik. Bestemmelse af adrenalkirtlernes glucocorticoidfunktion med aktiv lungtubberkulose afslører forekomsten af ​​hyperkortikisme hos de fleste patienter. Normale niveauer af koncentration cortisol blod i patienten med smitsom betændelse i den akutte periode bør betragtes som relative fiasko glucocorticoid funktion af binyrebarken, der kan tjene som grundlag for at holde doser effektiv substitutionsbehandling af glucocorticoider.

Næsten en tredjedel af patienterne med lungetuberkulose kan konstateres, at deres insulinminæmi er ret lavt og nærmer sig den nederste grænse for normen, mens 13-20% ser signifikant hyperinsulinisme. Både relativ hypo- og hyperinsulinisme er høje risikofaktorer for udviklingen af ​​kulhydratmetabolismen af ​​forskellig sværhedsgrad. Disse ændringer i den funktionelle aktivitet af pankreas B-celler kræver regelmæssig glykæmisk kontrol hos patienter med tuberkulose og rettidig forebyggelse af diabetes. Derudover. Dette tjener som en yderligere begrundelse for anvendelsen af ​​fysiologiske doser af insulin i den komplekse terapi af tuberkulose.

I almindelighed er et fald i thyroidhormoniveauer, deres ubalance, hypercortisolemi og hyperinsulinisme mest udtalte hos patienter med en alvorlig tuberkuløs proces med omfattende lungelæsioner og alvorlige symptomer på tuberkuløs forgiftning.

Mikrobiologisk diagnose af tuberkulose

Mikrobiologiske undersøgelser er nødvendige for at identificere patienter med tuberkulose, kontrollere diagnosen, overvåge og korrigere kemoterapi, evaluere behandlingsresultater, med andre ord fra tidspunktet for registrering af en patient med tuberkulose indtil fjernelse fra registeret.

Alle epidemiologiske programmer og projekter er baseret på et estimat af antallet af bakterieekskret, der ikke kan gøres uden brug af laboratoriemetoder til påvisning af mycobacterium tuberkulose. Ved undersøgelsen af ​​den såkaldte uorganiserede populations omsættelighed når andelen af ​​bakterielle udskillelser 70 eller derover, hvilket gør laboratoriemetoder til et ret effektivt middel til at identificere patienter med tuberkulose blandt denne gruppe af befolkningen.

Traditionelle mikrobiologiske metoder til diagnose af tuberkulose - bakterioskopiske og kulturelle studier. Moderne metoder overvejer dyrkning af mycobacterium tuberkulose i automatiserede systemer, PCR. Imidlertid er alle disse metoder nødvendigvis kombineret med klassiske bakteriologiske metoder.

Indsamling af diagnostisk materiale

Effekten af ​​laboratorieundersøgelser afhænger i høj grad af kvaliteten af ​​det diagnostiske materiale. Overholdelse af reglerne for indsamling, opbevaring og transport af diagnostisk materiale og den nøjagtige gennemførelse af algoritmen til undersøgelse af patienter påvirker direkte resultatet og sikrer biologisk sikkerhed.

Til forskning i tuberkulose ved hjælp af en række forskellige materialer. Skyldes, at TB logkih- mest almindelige form tuberkuloese læsioner, grundmaterialet for forskning Overvej spyt og andre former for aftagelig tracheobronkiale: øvre luftveje sekreter opnået efter aerosolinhalering: bronchiale vaskninger; bronchoalveolar lavages; materiale opnået ved bronkoskopi, transtracheal og intrapulmonal biopsi: aspirat fra bronchi, laryngeal udstødninger, ekssudater, udstødninger fra sår mv.

Effektiviteten af ​​forskningen øges, hvis de udfører en kontrolleret samling af materiale fra patienten. For at gøre dette skal du tildele et særligt udstyret værelse eller købe specielle hytter. Indsamling af materiale er en farlig procedure, så du skal indsamle materiale til forskning efter reglerne for smitsom sikkerhed.

Materiale til forskning om mycobacterium tuberculosis opsamles i sterile hætteglas med tæt skruede hætter for at forhindre forurening af miljøet og for at beskytte det opsamlede materiale mod forurening.

Hætteglas til indsamling af diagnostisk materiale skal opfylde følgende krav:

  • skal være fremstillet af slagfast materiale
  • bør smelte let under autoklavering;
  • være tilstrækkeligt volumen (40-50 ml):
  • have en bred åbning til sputumindsamling (diameter ikke mindre end 30 mm)
  • at være nem at bruge, gennemsigtig eller gennemskinnelig, så du kan vurdere mængden og kvaliteten af ​​den indsamlede prøve uden at åbne låget.

For at opnå optimale forskningsresultater skal følgende betingelser være opfyldt:

  • materialeindsamling udføres inden kemoterapiens begyndelse;
  • Materialet til undersøgelsen skal indsamles inden morgenindtagelse af mad og medicin;
  • Til forskning er det ønskeligt at indsamle mindst 3 prøver af morgensputum. Saml sputum i 3 på hinanden følgende dage;
  • Det indsamlede materiale skal leveres hurtigst muligt til laboratoriet:
  • I det tilfælde, hvor det er umuligt at straks levere materialet til laboratoriet, opbevares det i køleskab ved en lufttemperatur på 4 ° C i højst 48 timer;
  • Ved transport af materialet er det nødvendigt at omhyggeligt overvåge hætteglassets integritet.

Korrekt opsamlet sputum har en slim eller mucopurulent karakter. Det optimale volumen af ​​den undersøgte del af sputum er 3-5 ml.

Phlegm indsamles under tilsyn af en læge. Personer, der er ansvarlige for at samle sputum, er det nødvendigt at overvåge gennemførelsen af ​​visse regler:

  • Det er nødvendigt at forklare patienten formålet med undersøgelsen og behovet for at hoste op ikke spyt eller nasopharyngeal slim, men indholdet i det dybe luftveje. Dette kan opnås som et resultat af produktiv hoste, der opstår efter få (2-3) dybe vejrtrækninger. Det er også nødvendigt at advare patienten om, at han først skal skylle munden med kogt vand for at fjerne hovedparten af ​​den vegetative mikroflora i mundhulen og madrester, der hæmmer studiet af sputum;
  • en læge, der deltager i opsamlingen af ​​sputum, skal ud over en kappe og hætte have en maske, gummihandsker og et gummiforklæde;
  • står bag patienten, anbefales han at holde flasken så tæt som muligt på læberne og straks adskille sputumet ind i det, som det hoster, mens det er nødvendigt at sikre, at luftstrømmen er rettet væk fra sundhedsudbyderen:
  • Efter færdiggørelse af sputumindsamlingen skal lægehjælp forsigtigt lukke hætteglasset med en hætte og vurdere mængden og kvaliteten af ​​det opsamlede sputum. Derefter mærkes flasken og placeres i en speciel bix til transport til laboratoriet.

Hvis patienten ikke udsender sputum, skal natten før og tidligt om morgenen på dagen for indsamling af materialet gives en eksplosionsmiddel: ekstrakt af Altea-lægemidlet (mukaltin), bromhexin, ambroxol osv. - eller påfør irriterende indånding ved hjælp af udstyr installeret i opsamlingslokalet opspyt. Materiale indsamlet på denne måde kan ikke bevares og skal undersøges på dagen for indsamling. For at undgå hans "afvisning" i laboratoriet i retningen skal der laves et særligt mærke.

Hvis der ikke udføres mikrobiologisk forskning i denne institution, skal det indsamlede diagnostiske materiale leveres centralt til laboratoriet, under forudsætning af, at materialet skal opbevares obligatorisk mellem leveringer i køleskab eller ved anvendelse af konserveringsmidler. Lever materialet til laboratoriet i forsendelsesbokse, der nemt kan desinficeres. Hver prøve skal mærkes med den relevante etiket, og hele batchet skal udfyldes med den medfølgende formular.

Modeller og hyppighed af undersøgelse af patienter

Under den første såkaldte diagnostiske undersøgelse af en patient for tuberkulose er det nødvendigt at undersøge mindst 3 portioner af sputum inden for 2 eller 3 dage. indsamlet under tilsyn af medicinsk personale, hvilket øger effektiviteten af ​​mikroskopi.

Primær tuberkulosescreening skal udføres af alle medicinske diagnostiske institutioner i sundhedssystemet. For nylig at øge effektiviteten af ​​den primære undersøgelse på basis af kliniske diagnostiske laboratorier er såkaldte mikroskopi centre blevet organiseret, udstyret med moderne mikroskoper og udstyr til at sikre epidemisikkerhed.

I TB-anlæg anvendes en screeningsplan, som indebærer en undersøgelse af sputum eller andet diagnostisk materiale i mindst 3 gange inden for 3 dage. I løbet af behandlingen udføres mikrobiologiske undersøgelser regelmæssigt mindst en gang om måneden i fase med intensiv kemoterapi. Under overgangen til opfølgningsfasen udføres undersøgelser sjældnere - med intervaller på 2-3 måneder, mens undersøgelsens mangfoldighed reduceres til to.

Egenskaber ved indsamling af diagnostisk materiale i ekstrapulmonal tuberkulose

Det patologiske materiales egenart i ekstrapulmonale former for tuberkulose er en lav koncentration af mycobacterium tuberkulose i den, hvilket kræver mere følsomme metoder til mikrobiologisk forskning, først og fremmest metoder til plantning på et næringsmedium.

I urogenitalt tuberkulose er urin det mest tilgængelige forskningsmateriale. Urinprøveudtagning skal udføres af en uddannet sygeplejerske.

Eksterne kønsorganer vaskes med sæbe og vand eller en svag opløsning af kaliumpermanganat. Pas forsigtigt den udvendige åbning af urinrøret. En medium del af morgenurinen opsamles i et sterilt hætteglas: hos mænd - naturligvis hos kvinder - med et kateter. Urin fra nyrens bækken opsamles i sterile rør til kateterisering af en eller to nyrer, i sidstnævnte tilfælde - altid adskilt fra hver nyre. En lille mængde af denne urin centrifugeres, bundfaldet undersøges.

Hos mænd, sæd, punkteres testiklerne, prostesekretioner centrifugeres for at opnå sediment. Ved enhver lokalisering af en bestemt proces i kønsområdet hos mænd kan massage i prostata-kirtlen bidrage til udskillelsen af ​​mycobacteriumholdige sekretioner fra tuberkulose.

Menstruationsblod opsamles fra kvinder ved sugning eller ved brug af en Kafka cap. Det resulterende materiale frigives fra røde blodlegemer, vasker det med destilleret vand efterfulgt af centrifugering. Sediment undersøgt.

Udladning fra livmoderhalsen i livmoderen opsamles i en hvilken som helst beholder eller hætte af Kafka, det vil sige at det er ønskeligt at akkumulere 1-2 ml patologisk materiale.

Materialet opnået under operationen på nyrerne, kønsorganer. biopsier, skrabninger fra endometrium, homogeniseret. For at gøre dette placeres den i en steril mørtel og knuses grundigt med steril saks. Sterilt flodsand tilsættes til den resulterende suspension i en mængde svarende til dens masse, derefter tilsættes 0,5-1,0 ml isotonisk natriumchloridopløsning, og hele formales til dannelse af en pastaformig masse med tilsætning af isotonisk natriumchloridopløsning (4-5 ml). Derefter får massen lov til at afregne i 1-1,5 minutter, supernatanten undersøges.

Tuberkulose af knogler og led. Punctate (pus af abscessabcesser), opnået med en steril sprøjte, placeres i en steril beholder og straks leveres til laboratoriet. Steril pipette, fugtet med steril isotonisk natriumchloridopløsning, tage 2-5 ml pus, overfør den til flasken med perler og tilsæt endnu en 2-3 ml isotonisk natriumchloridopløsning. Flasken er lukket med en prop og rystet i jokeapparatet i 8-10 minutter. Den homogeniserede opslæmning undersøges.

For fistulous former for osteoarticular tuberkulose tages pus fra fistel. Rigelig udledning indsamles direkte i røret. I tilfælde af svag pus afladning vaskes fistlen med en steril isotonisk opløsning af natriumchlorid, og vaskevandene, der opsamles i et reagensglas eller et tampon, der er gennemblødt i pus, sendes til undersøgelse.

Kirurgisk materiale opnået under kirurgi på knogler og led, kan bestå af purulent-nekrotiske masser, granuleringer, ar, knoglevæv, væv af de synoviale membraner og andre substrater. Det behandles som i nyre tuberkulose.

Mikrobiologisk undersøgelse af synovialvæske i 3% natriumcitratopløsning (1: 1 forhold) for at forhindre koagulering udføres umiddelbart efter punktering.

Tuberkulose af lymfeknuder. Den pus, der ekstraheres under punkteringen af ​​lymfeknuderne, undersøges også. som pus af tarmabcesser. Lymfeknudevæv, der opnås under kirurgi, biopsier, undersøges som i andre former for tuberkulose.

Undersøgelsen af ​​fækale masser for mycobacterium tuberculosis er yderst sjælden på grund af den næsten fuldstændige mangel på positive resultater.

Mikroskopi mykobakterier

Sputummikroskopi er en relativt hurtig, enkel og billig metode, som bør anvendes i alle tilfælde af mistænkt tuberkulose. Derudover udføres denne undersøgelse for at vurdere effektiviteten af ​​kemoterapi og etablere genopretning eller et mislykket resultat af behandlingen i mangel af kulturresultater.

Brug 2 metoder til mikroskopisk undersøgelse:

  • direkte mikroskopi metode, når et smear er fremstillet direkte fra et diagnostisk materiale;
  • mikroskopi metode til sediment fremstillet ud fra dekontamineret materiale til dyrkning.

Den første metode anvendes i laboratorier, hvor kun mikroskopiske undersøgelser udføres (kliniske diagnostiske laboratorier i det generelle medicinske netværk).

De bedste resultater af mikroskopisk undersøgelse opnås ved at koncentrere det diagnostiske materiale (for eksempel ved centrifugering).

For at detektere mycobacterium tuberculosis med en 50% chance for mikroskopi, skal 1 ml sputum indeholde mere end 5.000 mikrobielle celler. Slaget hos patienter med lungerformer af tuberkulose indeholder sædvanligvis en signifikant mængde syrefaste bakterier, som gør det muligt for dem selv at identificere dem under bakterioskopi. Den diagnostiske følsomhed ved denne metode kan forbedres ved at undersøge flere sputumprøver fra en patient. En negativ bakterioskopi udelukker ikke en diagnose af tuberkulose, fordi nogle patients sputum indeholder mindre mykobakterier end detekteres ved mikroskopi. Dårlig forberedelse af sputumudslæt kan også være årsagen til en negativ bakterioskopisk undersøgelse.

Den mest almindelige metode til at detektere syrefaste mykobakterier i et smear er farvning ifølge Ziehl-Nelsen. Metoden er baseret på penetration af carbolic fuchsin i mikrobiel cellen gennem membranen, som omfatter et vokslipidlag med de samtidige virkninger af opvarmning og en stærk ætsende virkning af phenol. Den efterfølgende misfarvning af smøret med en 25% opløsning af svovlsyre eller 3% saltsyre resulterer i misfarvning af alle ikke-sure resistente strukturer. Blegede smøreelementer farves med en 0,3% opløsning af methylenblåt. Mycobakterier opfatter ikke de sædvanlige anilinfarvestoffer, hvorved de syrebestandige mykobakterier er malet i hindbærrød farve og andre mikrober og cellulære elementer - i blåt.

Til undersøgelse af udtværinger farvet med Zilu-Nelsen anvendes et let kikkertmikroskop med et nedsænkningsmål (90 eller 100 gange forstørrelse) og et okular med 7 eller 10 gange forstørrelse. Undersøg 100 synsfelter, som er tilstrækkelige til at identificere i de enkelte mykobakterier. I tilfælde af at resultatet af en sådan undersøgelse er negativ, anbefales det at se yderligere 200 synsfelter for at bekræfte. Optag resultaterne, hvilket angiver antallet af detekterede syrefaste mykobakterier (CUM).

Ud over denne teknik anvendes fluorokromer til fluorescerende mikroskopi, hvilket gør det muligt at opnå de bedste resultater. Anvendelsen af ​​denne metode øger effektiviteten af ​​mikroskopien med 10-15%. Ved behandling af mycobacterium-luminescerende farvestoffer (auramin, rhodamin, etc.) er disse stoffer også forbundet med vokslignende strukturer i den mikrobielle celle. Når en maleret celle bestråles med en spændende lyskilde (et bestemt spektrum af ultraviolet stråling), begynder de at lyse orange eller lyst rødt lys mod en sort eller mørkegrøn baggrund. På grund af den synlige billedets høje lysstyrke og kontrast er det muligt at reducere den samlede forstørrelse af mikroskopet med 4-10 gange, hvilket udvider synsfeltet og reducerer forberedelsestidspunktet. Sammen med dette på grund af en meget større dybdeskarphed kan man øge undersøgelsens komfort.

Ved brug af fluorescensmikroskopi tager det meget mindre tid at se det samme område af et smear end ved lysmikroskopi af udtværinger farvet med Tsil-Nelsen. Hvis en mikroskopiker gennem en arbejdsdag ser på omkring 20-25 sådanne smører, så bruger han fluorescensmikroskopi, kan han undersøge mere end 60-80 prøver på samme tid. Erfarne mikroskopere ved, at cellefarvning med en blanding af auramin og rhodamin på en eller anden måde er specifik for syrefaste mykobakterier, som i dette tilfælde har udseendet af gyldne pinde. Saprophytes er farvede grønne.

En anden vigtig fordel ved metoden med fluorescensmikroskopi er evnen til at detektere modificerede mycobakterier, der har tabt under påvirkning af en række ugunstige faktorer, især intensiv kemoterapi, egenskaben af ​​syrebestandighed og detekteres ikke i denne sammenhæng, når de farves med Tsil-Nelsen.

Ulemperne ved fluorescensmikroskopi indbefatter de relativt høje omkostninger ved mikroskopet og dets drift. Men i centraliserede eller andre store laboratorier, hvor belastningen overstiger graden af ​​3 teknikere, der arbejder med tre konventionelle mikroskoper, er det i stedet billigere at anvende et enkelt fluorescensmikroskop.

Bakterioskopiske metoder har ret høj specificitet (89-100%). Ca. 97% af de positive resultater opnået ved en hvilken som helst metode til mikroskopi bekræftes entydigt af resultaterne af såning.

Det skal bemærkes, at mikroskopisk undersøgelse af et udstrygning af et patologisk materiale ikke kan bestemme arten af ​​identificerede syrebestandige mykobakterier. Metoden til mikroskopi gør det muligt for os kun at konkludere om tilstedeværelsen eller fraværet af syrefaste mikroorganismer i præparatet, hvilket forklares ved eksistensen af ​​et stort antal tuberkulose-ikke-tuberkulære syrefaste mikroorganismer morfologisk ligner mycobakterier.

Evaluering af resultaterne af mikroskopi produceret i semikvantitative enheder.

For at kunne sammenligne resultaterne fra forskellige metoder til mikroskopi introduceres empiriske koefficienter. For at sammenligne resultaterne af et smear farvet med fluorescerende farvestoffer med lysmikroskopiedata (1000x forstørrelse) er det nødvendigt at dividere antallet af syrefaste mycobakterier detekteret af et fluorescerende mikroskop ved den tilsvarende faktor ved en 250x forstørrelse af mikroskopet med 10, med 450 gange - ved 4, med 630 gange - ved 2.

Egenskaber ved mikroskopi i ekstrapulmonal tuberkulose

Direkte mikroskopi udføres såvel som smearmikroskopi fremstillet efter berigelse efterfulgt af Zill-Nelsen-farvning eller luminescerende farvestoffer. Direkte smearmikroskopi er ineffektiv på grund af den lave koncentration af mykobakterier i materialet, og derfor er det mere rationelt at anvende berigelsesmetoder. Centrifugering er mest effektiv. Hvis det biologiske materiale er viskøst, påføres centrifugering med samtidig homogenisering og kondensation af materialet, som udføres under anvendelse af højhastighedscentrifuger med en centrifugalkraft på 3000 g og hypochloritopløsninger. Andre berigelsesmetoder, såsom mikroflotation, anvendes i øjeblikket ikke på grund af dannelsen af ​​biologisk farlige aerosoler.

Kulturel metode til diagnose af tuberkulose

Seedmetoden eller kulturmetoden er mere følsom end smearmikroskopi og har flere fordele i forhold til sidstnævnte. Det giver mulighed for at detektere flere titler levedygtige mykobakterier i det undersøgte materiale og har en stor diagnostisk værdi. Dette er især vigtigt i studiet af materiale fra nyligt diagnosticerede eller behandlede patienter, der udskiller en lille mængde mykobakterier.

Sammenlignet med mikroskopi kan en kulturundersøgelse øge antallet af identificerede tuberkulosepatienter med mere end 15-25% og også bekræfte tuberkulose i tidligere stadier, når sygdommen stadig er god behandlingsbar. En meget vigtig fordel ved kulturforskning er muligheden for at opnå en patogenkultur, som kan identificeres og studeres i forhold til stoffets følsomhed, virulens og andre biologiske egenskaber.

Ulemperne med dyrkningsmetoder indbefatter deres varighed (ventetiden for materialer når 10 uger). højere omkostninger, behandling af kompleksitet af det diagnostiske materiale.

Principper for presowing behandling af diagnostisk materiale

Konventionelle mikrobiologiske teknikker kan ikke anvendes til forskning i tuberkulose. Dette skyldes det faktum. at mycobacterium tuberculosis vokser meget langsomt, og de fleste af prøverne af klinisk materiale indeholder hurtigt voksende pyogene og putrefaktive mikroorganismer, svampe. Deres hurtige vækst på rige næringsmedier forhindrer udviklingen af ​​mykobakterier og tillader ikke at isolere tuberkulosens forårsagende middel. Derfor skal det diagnostiske materiale forbehandles forud for såning. Desuden er mykobakterier, der frigives fra patientens luftveje, omgivet af en stor mængde slim, hvilket gør det vanskeligt at koncentrere sig. I denne henseende er det nødvendigt inden lukning af sputum og andre lignende materialer, at de er flydende og dekontamineret.

Alle vaskemidler og dekontaminanter har en mere eller mindre udtalt toksisk virkning på mykobakterier. Som et resultat af behandlingen kan op til 90% af mykobakterierne dø. For at bevare en tilstrækkelig del af mycobakteriepopulationen er det nødvendigt at anvende blide behandlingsmetoder, der tillader på den ene side at undertrykke hurtigt voksende pyogene og putrefaktive mikroorganismer og på den anden side at bevare levedygtigheden af ​​de mycobakterier, der er til stede i materialet.

Afhængig af materialet anvendes dens grad af homogenitet og forurening, forskellige dekontaminanter til presowing behandling: For sputum - natriumhydroxidopløsning 4%, opløsninger af tre-substitueret natriumphosphat 10% benzalkoniumchlorid trinatriumphosphat, NALC-NaOH (N-acetyl-L-cystein- natriumhydroxid) med en slutlig NaOH-koncentration på 1% for urin og andre flydende materialer - en opløsning af svovlsyre 3%, for forurenede prøver, fedtholdige materialer - en opløsning af oxalsyre op til 5%. Derudover anvendes i nogle tilfælde enzymer, overfladeaktive stoffer (vaske- og rengøringsmidler). Anvendelsen af ​​tween og nogle andre vaskemidler ledsages af mindre død af mycobakterielle celler (40-50% overlever). De kan dog kun bruges til flydende materialer. Den mest udbredte i verden modtog NALC-NaOH. udgivet i sæt. Denne metode gør det muligt at isolere mere end 85% af mycobakterielle cellepopulationer. Dekontaminering af vævsholdige faste materialer er vanskeligere, da det er svært at gætte graden af ​​dispersion af materialet under homogeniseringsprocessen. For eksempel ledsages behandlingen af ​​biopsiprøver af lymfeknuder ofte af en forøget kontamineringsfrekvens med ekstern flora. I dette tilfælde kan 1% etonium anvendes.

Ikke-homogent materiale homogeniseres ved anvendelse af glasperler i nærværelse af dekontaminanter. Flydende materialer er præcentrifugeret, og kun sediment behandles.

Sånings- og inkubationsteknikker

Efter forbehandling centrifugeres materialet, hvorfor mycobakterierne udfældes, og deres indhold i sedimentet øges ("sediment berigelse"). Det resulterende bundfald underkastes neutralisering og podes med det (podet) overfladen af ​​tætte næringsmedier eller reagensglas med flydende (halvvæske) medier. Fra den resterende del af sedimentet udarbejdes smøreprøver til mikroskopisk undersøgelse. Såningsteknikken bør forhindre krydskontaminering af det diagnostiske materiale.

For en pålidelig klinisk fortolkning af resultaterne af mikrobiologisk forskning er det nødvendigt at overholde følgende regel: Mikroskopiske og kulturelle undersøgelser skal udføres parallelt fra samme prøve af diagnostisk materiale.

Inokulerede rør anbringes i en termostat ved 37 o C i 2 dage i vandret position. Dette giver en mere ensartet absorption af materialet i næringsmediet. Efter 2 dage overføres rørene lodret og hermetisk forseglet med gummi- eller silikonepropper for at forhindre, at de udsåede medier tørrer ud.

Afgrøder opbevares i en termostat ved 37 o C i 10-12 uger med regelmæssig ugentlig visning. Med hver testvisning registreres følgende parametre:

  • sigt visuelt observeret fra datoen for såningstilvækst
  • vækstrate (antal CFU);
  • forurening af plantning med fremmed mikrobiell flora eller svampe (sådanne rør fjernes);
  • ingen synlig vækst. Rørene er efterladt i termostaten indtil næste visning.

Næringsmedier

Til dyrkning af mykobakterier ved anvendelse af forskellige næringsmedier tæt, halvflydende, flydende. Intet af de kendte næringsmedier har imidlertid de egenskaber, der sikrer væksten af ​​alle mycobakterielle celler. I denne henseende anbefales det at bruge samtidig 2-3 næringsmedier af forskellig sammensætning.

Som et standardmedium til primær isolering af tuberkulosens forårsagende middel og bestemmelsen af ​​dets lægemiddelfølsomhed anbefaler WHO Lowenstein-Jensen medium. Dette er et tæt ægmedium, hvorpå væksten af ​​mykobakterier opnås på den 20-25 dag efter sådning af bakterioskopisk positivt materiale. Afgrøder af bakterioskopisk negativt materiale kræver en længere inkubationsperiode (op til 10-12 uger).

I vores land er den foreslåede fordeling af E.R. Finn Egg Medium Finn II. Det adskiller sig i, at i stedet for L-asparagin bruger det mononatriumglutamat, som udløser andre måder til syntesen af ​​aminosyrernes mykobakterier. Vækst fremkommer på dette medium lidt tidligere, og hyppigheden af ​​mykobakteriel sekretion er 6-8% højere end på Levenshtein-Jensen medium.

For at forbedre effektiviteten af ​​bakteriologisk diagnose af ekstrapulmonalt tuberkulose anbefales det at inkludere Finn-II modificerede medier i næringsmediernes kompleks. For at accelerere væksten tilsættes natriumthioglycolat (0,05%) til næringsmediet Finn-II, hvilket reducerer iltkoncentrationen. For at beskytte de mykobakterielle enzymsystemer fra giftige lipidperoxidationsprodukter indføres a-tocopherolacetatantioxidanten i næringsmediet Finn-II i en koncentration på 0,001 μg / ml. Såning af diagnostisk materiale produceret ved standardmetoden.

I Rusland's TB-laboratorier anvendes også andre modifikationer af faste næringsmedier; foreslået af G.G. Mordovian næringsmedium "New", udviklet af V.A. Anikin næringsmedium A-6 og A-9 osv.

På grund af det faktum, at under kemoterapi er forskellige metaboliske systemer i den mikrobielle celle beskadiget, mister en del af den mykobakterielle population sin evne til at udvikle sig normalt på almindelige næringsmedier og kræver osmotisk afbalanceret (halvflydende eller flydende) næringsmedier.

Evaluering og registrering af resultaterne af såning af diagnostisk materiale

Nogle stammer og typer mycobakterier vokser langsomt, vækst kan fremkomme selv ved den 90. dag. Antallet af sådanne afgrøder er lille, men det gør dem i stand til at modstå afgrøder i en termostat i 2,5-3 måneder.

Virulente kulturer af mycobacterium tuberculosis vokser normalt på tætte ægmedier i form af R-former af kolonier af forskellig størrelse og art. Kolonier er tørre, rynket, elfenben, lidt pigmenteret. I andre miljøer kan kolonier af Mycobacterium tuberculosis være mere fugtige. Efter et kursus af kemoterapi eller i løbet af behandlingen kan glatte kolonier med våd vækst (S-former) frigives.

Ved isolering af afgrøder anvendes en række specialstudier til at skelne mycobacterium tuberculosis fra ikke-tuberkuløse mykobakterier og syrefaste saprophytter.

Et positivt svar gives efter en obligatorisk mikroskopisk undersøgelse af et smear farvet med Zil-Nelsen fra dyrkede kolonier. I tilfælde af væksten af ​​mykobakterier i udtværinger findes lyse røde stænger, der ligger enkeltvis eller i grupper og danner klynger i form af filt eller fletninger. I unge kulturer, især dem, der er isoleret fra patienter behandlet med kemoterapi i lang tid, er mykobakterier karakteriseret ved udpræget polymorfisme, op til nærvær af korte, næsten coccoid eller langstrakte varianter, svarende til svampemyceliet sammen med stavformede former.

Væksthastigheden for mykobakterier er angivet ved følgende skema: (+) - 1-20 CFU i et reagensglas (skånsom bakteriel udskillelse); (++) - 20-100 CFU in vitro (moderat bakteriel udskillelse); (+++) -> 100 CFU in vitro (rigelig bakterieudskillelse). I laboratoriediagnostik af tuberkulose er det ikke nok at give et svar, om mycobacterium er påvist ved denne eller den pågældende metode. have en detaljeret forståelse af volumen og arten af ​​den mykobakterielle population, dens sammensætning og egenskaber. Det er disse data, der gør det muligt at fortolke procesens tilstand korrekt, planlægge taktik og straks rette behandlingen.

I de senere år er der foreslået næringsmedier på agarbase med forskellige væksttilskud og anvendelse af en særlig gasblanding for at fremskynde væksten af ​​mykobakterier. For at opnå væksten af ​​mykobakterier på disse miljøer under dyrkning, skab en atmosfære med et højt indhold af carbondioxid (4-7%). Til dette formål skal du bruge special WITH2-væksthuse. Men de mest udviklede automatiserede systemer til dyrkning af mykobakterier: MGIT-BACTEC-960 og MB / Bact.

Et af disse systemer er MGIT-systemet (mycobacteria growth indicating tube), der tilhører udviklingen af ​​høje teknologier og er designet til at fremskynde den bakteriologiske diagnose af tuberkulose og bestemme følsomheden af ​​mycobakterier til førstelinie lægemidler og nogle andenlinie medicin. MGIT er fokuseret på at bruge det som en del af VASTES-960-enheden. Mikroorganismer dyrkes i specielle rør med et flydende næringsmedium på basis af det modificerede medium Middlebrook-7H9. For at stimulere væksten af ​​mykobakterier og hæmme væksten af ​​fremmed mikroflora, anvendes MGIT Growth Supplement væksttilskud og en blanding af antibakterielle lægemidler PANTA.

Registreringen af ​​væksten af ​​mikroorganismer udføres optisk. Det er baseret på fluorescens som følge af mycobakteriernes forbrug af ilt i vækstprocessen. Et iltafhængigt fluorokromfarvestof er indeholdt i bunden af ​​et specielt testrør og er belagt med et lag silicone. Reproduktion af mykobakterier fører til et fald i mængden af ​​ilt i røret og et fald i koncentrationen, hvilket medfører en stigning i fluorescens, som bliver synlig, når røret er bestrålet med ultraviolet lys og automatisk detekteres af fotosensorer indbygget i VASTES-960-enheden. Intensiteten af ​​gløden registreret i vækstenheder (GU-vækst-enheder). Vækstdata indføres i en computer, hvor den kan gemmes automatisk. Computeranalyse af vækstkurver kan give information om tilstedeværelsen af ​​forskellige puljer af mycobakterier, herunder ikke-tuberkuløse, og hjælper også med at vurdere mycobakteriernes vækstegenskaber.

Som et resultat af indførelsen af ​​sådanne systemer blev tiden for fremkomsten af ​​væksten af ​​mycobakterier signifikant reduceret i gennemsnit 11 dage på WASTES-960 og 19 dage på MB / Bact versus 33 dage på et standard tæt næringsmedium. Det skal bemærkes, at disse systemer kræver højt kvalificeret personale. Såningsmaterialer på flydende medier skal ledsages af såning på Levenshteyn-Jensen medium, der spiller rollen som en stand-in i tilfælde, hvor tuberkulose ikke giver anledning til vækst på andre medier.

Bestemmelse af mycobakteriers medikamentfølsomhed

Bestemmelse af mycobakteriernes spektrum og grad af følsomhed overfor anti-tuberkulosemedicin er af klinisk betydning såvel som til den epidemiologiske vurdering af spredningen af ​​lægemiddelresistent tuberkulose. Derudover tillader overvågningen af ​​lægemiddelresistens at evaluere effektiviteten af ​​anti-tuberkulose-programmet som helhed, idet det er en integreret indikator for arbejdet i alle bestanddele af anti-tuberkuloseaktiviteter.

Multiplikationen og timingen af ​​stoffets følsomhed:

  • før behandlingens start en gang for at bestemme strategien og taktikken for behandlingen:
  • når isolering fra patientkulturer fra forskellige materialer (sputum, BAL, urin, ekssudater, cerebrospinalvæske osv.) undersøges alle isolerede stammer:
  • i slutningen af ​​den intensive behandlingsfase i mangel af klinisk og radiologisk dynamik:
  • Om nødvendigt ændrer behandlingsregimen i tilfælde af:
    • mangel på sputum negativitet;
    • re-kultur efter sputum negativitet;
    • en kraftig stigning i antallet af KUM i et smear efter det oprindelige fald. Det er velkendt, at stammer af Mycobacterium tuberculosis, som er heterogene med hensyn til lægemiddelfølsomhed, isoleres fra materialet fra en patient med tuberkulose. Stammenes følsomhed over for anti-tuberkulosemedier kan variere inden for rækkevidde af stoffer, graden, hyppigheden og modstandsdygtigheden.

Graden af ​​lægemiddelresistens for Mycobacterium tuberculosis bestemmes i overensstemmelse med etablerede kriterier, der er fokuseret på resistens kliniske betydning og afhænger af lægemidlets anti-tuberkuloseaktivitet, dets farmakokinetik og koncentration i læsionen. maksimal terapeutisk dosis og så videre.

Bestemmelse af mycobakteriers lægemiddelfølsomhed udføres for øjeblikket ved mikrobiologiske metoder:

  • absolutte koncentrationer (fortyndingsmetode på faste eller flydende næringsmedier),
  • proportioner,
  • modstandskoefficient.

Modstand manifesterer sig sædvanligvis i form af visuelt observeret vækst af kolonier af Mycobacterium tuberculosis, men der er teknikker, som fremkalder vækst i de tidlige stadier af divisionen af ​​Mycobacterium-celler i form af farvereaktioner. Disse metoder reducerer testtiden fra 3-4 til 2 uger.

Metoden for absolutte koncentrationer anbefalet af WHO's kemoterapiudvalg, som er metodologisk den enkleste, men kræver en høj standardisering og nøjagtighed af laboratorieprocedurer, er blevet udbredt i Rusland. Lægemiddelmodtagelsestesten består af et sæt rør med et næringsmedium modificeret med anti-tuberkulosemediciner. Sættet består af 2-3 rør med forskellige koncentrationer af hver af de anvendte lægemidler, et kontrolrør med medium uden lægemiddel og et rør indeholdende 1000 μg / ml natriumsalicylat eller 500 μg / ml para-nitrobenzoesyre for at detektere væksten af ​​ikke-tuberkuløse mykobakterier.

Til fremstilling af et sæt medier med lægemidler ved anvendelse af et modificeret medium Lowenstein-Jensen (uden stivelse), som hældes i kolber. I hver af kolberne tilføjes en vis mængde af den passende fortynding af anti-TB-lægemidlet. Indholdet af kolberne blandes grundigt, hældes i reagensglas og rulles i en skrånende stilling i 40 minutter ved en temperatur på 85 ° C. Det anbefales at koagulere mediet i en elektrisk skruetrækker med automatisk temperaturregulering. Medium med anti-tuberkulosemedicin

1. række kan opbevares i køleskab ved 2-4 ° C i 1 måned, med 2. række lægemidler - ikke mere end 2 uger. Lagringsmedier med narkotika ved stuetemperatur er uacceptable. Ved fremstilling af opløsninger af anti-tuberkulosemediciner tages der hensyn til deres aktivitet, beregning af koncentrationen, justeret for molekylvægten af ​​den ikke-specifikke del af lægemidlet, renhed mv. At bestemme stoffets følsomhed ved kun at anvende kemisk rene stoffer.

Princippet med metoden består i at bestemme koncentrationen af ​​anti-tuberkulosemedikamentet, som undertrykker væksten af ​​en væsentlig del af mycobakteriepopulationen. Når den er udført korrekt, har denne metode god nøjagtighed.

Før testning er det nødvendigt at sikre, at den valgte kultur af Mycobacterium tuberculosis ikke har fremmed mikroflora. Fra en kultur af mykobakterier i en 0,9% opløsning af natriumchlorid fremstilles en homogen suspension, der indeholder 500 millioner mikrobielle celler i 1 ml (optisk turbiditetsstandard på 5 enheder). Den resulterende suspension fortyndes med 0,9% natriumchloridopløsning (1:10), og der tilsættes 0,2 ml suspension til hvert rør af et sæt dyrkningsmedier. Sårede rør anbringes i en termostat ved 37 ° C og holdes i en vandret position i 2-3 dage, således at næringsmediumets afskårne overflade er jævnt podet med en suspension af mycobacterium tuberculosis. Derefter overføres rørene til lodret position og inkuberes i 3-4 uger. Resultatmåling udføres i 3-4 uger.

Da tidspunktet for isolering af et patogen fra klinisk materiale på næringsmedier er mindst 1-1,5 måneder, kan resultaterne af bestemmelse af lægemiddelfølsomhed ved denne fremgangsmåde opnås ikke tidligere end 2-2,5 måneder efter såning af materialet. Dette er en af ​​de største ulemper ved fremgangsmåden.

Fortolk resultaterne af bestemmelse af mycobakteriernes følsomhed baseret på bestemte kriterier. På tætte medier anses en kultur for at være følsom over for koncentrationen af ​​lægemidlet, der er indeholdt i mediet, hvis antallet af mykobakteriernes kolonier vokset på dette rør med lægemidlet ikke overstiger 20 med rigelig vækst på kontrolrøret uden medicin. Kun i nærværelse af mere end 20 kolonier betragtes kulturen som resistent over for denne koncentration. I praksis får man, når man modtager resultaterne af vækst i reagensglas, tæt på 20 CFU. Det er nødvendigt at underrette den kliniske enhed om, at følsomheden eller stabiliteten i dette tilfælde er af grænseoverskridende karakter, da det nogle gange kan forklare den vage dynamik i de kliniske indikatorer.

For forskellige lægemidler er der etableret en vis koncentration, hvor multiplikationen af ​​den kritiske mycobakterielle population observeres. Disse koncentrationer kaldes "kritisk". Som et kriterium for stabilitet anvendes størrelsen af ​​væksten af ​​den mykobakterielle population på næringsmediet med lægemidlet i en kritisk koncentration.

I den indenlandske fisiologiske praksis ved bestemmelse af lægemiddelresistens er ikke begrænset til kun at bestemme kritiske koncentrationer. Dette skyldes det faktum. at den udvidede bestemmelse af niveauet af lægemiddelresistens for patogenet gør det muligt for klinikeren mere korrekt at danne kemoterapi taktik ved anvendelse af viden om den potentierende effekt af lægemiddelkombinationer, for at forudse krydsresistens eller at anvende mere effektive lægemidler fra gruppen af ​​anvendte anti-tuberkulosemediciner.

Metoden for absolutte koncentrationer er dog den enkleste og mest følsomme for fejl i dens gennemførelse. Mere pålidelig, især ved bestemmelse af følsomhed over for andre lægemidler, og metoden for proportioner er almindelig udenfor Rusland. Det tager hensyn til manglerne i den absolutte koncentrationsmetode, men det er mere tidskrævende at udføre.

Metoden ligner meget den absolutte koncentrationsmetode. Forberedelse af reagensglas med lægemidler fremstillet på samme måde. som med den absolutte koncentrationsmetode. Sådosedosen af ​​en suspension af Mycobacterium tuberculosis reduceres dog med 10 gange. der niveauer hyppigheden af ​​spontan modstand af nogle stammer af Mycobacterium tuberculosis til lægemidler som ethambutol, protionamid, capreomycin. Som kontrol skal der anvendes 2 eller 3 rør med en frødosis svarende til testrørene, serielt fortyndet 10 og 100 gange. Modstandskriteriet er andelen af ​​visuelt observeret vækst af Mycobacterium tuberculosis. For lægemidler af 1. række er kriteriet for bæredygtighed overskuddet af vækst på 1% af den oprindelige population, for lægemidler af 2. række - vækst på 1 eller mere end 10% af basislinjen afhængigt af den valgte kritiske koncentration.

I 1997 gjorde WHO's arbejdsgruppe og den internationale anti-tuberkuloseunion til påvisning af anti-tuberkulosemedicin resistens tilpasninger af disse kriterier, hvilket tyder på, at mykobakterier, der vokser på det tætte ægmedium af Levenshteyn-Jensen, betragtes som stabile ved følgende koncentrationer:

  • dihydrostreptomycin - 4 μg / ml;
  • isoniazid - 0,2 μg / ml:
  • rifampicin - 40 μg / ml:
  • Ethambutol - 2 μg / ml.

I 2001 blev der foreslået kritiske koncentrationer for følgende lægemidler på anden linje (for en kritisk andel på 1%):

  • capreomycin - 40 μg / ml;
  • protionamid - 40 μg / ml;
  • kanamycin - 30 μg / ml;
  • viomycin - 30 μg / ml;
  • cycloserin - 40 μg / ml;
  • aminosalicylsyre - 0,5 μg / ml;
  • Ofloxacin - 2 μg / ml.

Vækstresultater vurderes efter 4 uger som foreløbig og efter 6 ugers dyrkning som endelig.

For at bestemme narkotikafølsomheden over for pyrazinamid, som i vid udstrækning anvendes i moderne kemoterapi af tuberkulose, er den anbefalede kritiske koncentration 200 μg / ml. Imidlertid er der stadig ingen generelt accepteret fremgangsmåde til bestemmelse af lægemiddelresistens over for dette lægemiddel på faste næringsmedier, da dets antibakterielle aktivitet kun manifesteres i et surt medium (pH o C;

  • mangel på pigmentdannelse (elfenben farve);
  • Udtalt syrebestandig farve;
  • positiv niacin dej;
  • positiv nitratreduktase test;
  • fraværet af termostabil katalase (68 oC).
  • Manglende vækst på miljøet Levenshteyn-Jensen, der indeholder:
    • 1000 μg / ml natriumsalicylat,
    • 500 μg / ml paranitrobenzoesyre,
    • 5% natriumchlorid:
  • vækst i nærvær af 1-5 μg / ml thiophen-2-carboxylsyre.
  • Relevansen af ​​differentiering af isolerede mykobakterier vil stige markant med en stigning i hyppigheden af ​​registrering af tilfælde af hiv / aids i forbindelse med tuberkulose eller mycobakterier. I øjeblikket er der ingen absolut sikkerhed for, at praktiske regionale laboratorier er klar til at udføre denne mængde arbejde korrekt.

    Immunologisk diagnose af tuberkulose

    Der er en række universelle fænomener, stoffer og immunologiske tests, der oprindeligt blev opdaget under tuberkulose eller på modellen af ​​immunresponset mod mykobakterier. Disse omfatter BCG og tuberkulin, et fænomen som kutan HRT (tuberkulinprøver - Pirke og Mantoux reaktionerne), reaktionen på subkutan administration af tuberkulin til sensibiliserede dyr (Koch-fænomen). Nogle af de første antistoffer i en smitsom sygdom blev også fundet i tuberkulose. Selvfølgelig kan jo bredere forståelsen af ​​mekanismerne for anti-tuberkuloseimmunitet og deres genetiske kontrol være brugen af ​​immunologiske metoder og lægemidler, som påvirker immunsystemet til at løse praktiske problemer med fytiologi.

    Det vigtigste og mest vanskelige praktiske problem anses for øjeblikket for at være detektion af tuberkulose i massescreening af befolkningen. På trods af adskillige rapporter om "succeser" (på begrænset materiale) er der imidlertid ingen egnet immunologisk metode (reproduceret i "nogen hænder") og et præparat til disse formål.

    Immunologiske metoder, især serologiske undersøgelser (definitionen af ​​antigener, antistoffer) og tuberkulin provokationstest anvendes meget i klinisk praksis.

    For det første er der blandt de immunologiske undersøgelser, der anvendes i differentialdiagnosen, serologiske metoder - definitionen af ​​antigener og antistoffer i forskellige medier i kroppen.

    Specificiteten af ​​bestemmelsen af ​​antistoffer mod mycobacterium tuberkulose afhænger af antigenerne anvendt i immunanalysen. En signifikant mængde antigener er blevet foreslået, hvoraf den første er tuberkulin PPD:

    • PPD og andre komplekse præparater fra kulturfluidet;
    • ultralyd desintegrat;
    • Triton ekstrakt og andre komplekse præparater af cellevægge;
    • 5 antigen (Daniel);
    • 60 antigen (Coccito);
    • lipoarabinomannan;
    • ledningsfaktor (trehalose-6,6-di-micolat);
    • phenol og andre glycolipider;
    • lipopolysaccharid;
    • fibronectinbindende antigen;
    • proteiner (oftest rekombinante); 81,65,38,34,30,19,18,16,15,12 KDA og andre.

    Som et resultat af mange års forskning fra russiske og udenlandske forskere blev de vigtigste mønstre af antistofproduktion og effektiviteten af ​​serologisk diagnose af tuberkulose afsløret: Jo mere komplekse antigenet er, desto højere er følsomheden og sænker testets specificitet. Specificitet i forskellige lande varierer afhængigt af infektionen af ​​M. tuberculosis-populationen og ikke-tuberkuløse mykobakterier, om vaccination af BCG osv. Hos børn er informativiteten af ​​serodiagnose lavere end hos voksne. I primær tuberkulose (ofte børn) er definitionen af ​​IgM mere informativ. med sekundær IgG. I HIV-inficerede serodiagnostiske oplysninger formindsker bestemmelsen af ​​antistoffer. Effektivitet bestemmelse af antistoffer afhænger af antallet af "kliniske aspekter": proces aktivitet (tilstedeværelsen eller fraværet af "isolation" mycobakterier tilstedeværelse henfald af hulrum, graden af ​​infiltration), forekomsten af ​​processen, varigheden af ​​dets strømning.

    Sensibiliteten af ​​enzymimmunoassay-metoden (ELISA) er ca. 70%. Undersøgelsen af ​​effektiviteten af ​​undersøgelsen skyldes dens lave specificitet. Tidligere blev muligheden for at anvende serologisk screening i højrisikogrupper, især blandt personer med post-tuberkuloseændringer i lungerne, overvejet.

    For at øge specificiteten af ​​ELISA fortsætter søgningen efter mere specifikke antigener, herunder dem der opnås ved genteknologi, ESAT-6 og andre (se ovenfor). Anvendelsen af ​​strengt specifikke antigener (38 kDa, ESAT) øger specificiteten. men reducerer analysens følsomhed signifikant. Sammen med ELISA (eksperimentelle laboratorietestsystemer, for eksempel Pathozyme ELISA kit), immunochromatografiske kits med lateral filtrering (Mycodot) samt andre lignende tests (dot-analyse på membranen) med visuel vurdering af resultatet af undersøgelsen er blevet foreslået. Ved udførelsen af ​​disse tests foregår analysen inden for 10-30 minutter; de kræver ikke særligt udstyr, kræver en visuel vurdering af resultaterne, som er forbundet med en kendt subjektivitet. Disse metoder har omtrent samme karakteristika for følsomhed og specificitet (henholdsvis 70% og 90-93%) som den traditionelle ELISA.

    Anvendelsen af ​​immunanalysemetoder har en vis værdi som en ekstra, der tages i betragtning i komplekset af de metoder, der anvendes i differentialdiagnosen af ​​tuberkulose, især ved diagnosen af ​​dets ekstrapulmonale former. ELISA er mest effektivt til diagnosticering af tuberkuløs meningitis i undersøgelsen af ​​cerebrospinalvæske. I dette tilfælde er følsomheden af ​​analysen 80-85%, og specificiteten er 97-98%. Der er tegn på effektiviteten af ​​bestemmelsen af ​​antistoffer mod mycobacterium tuberkulose i tårevæske ved diagnosen tuberkuløs uveitis.

    Induktion af syntesen af ​​gamma-interferon in vitro

    Gamma-interferon (IFN-y) er en faktor af specifikt immunforsvar, som realiseres ved aktivering af makrofag-enzymsystemer. Induktion af syntesen af ​​IFN-y ved sensibiliserede T-lymfocytter forårsager deres interaktion med mykobakterielle antigener.

    Som antigener anvendes som tuberkulin PPD. og specifikke antigener opnået ved genteknologi, især antigener ESAT-6 (tidligt udskilt antigen med en molekylvægt på 6 kDa) og CFP-10 (proteinkulturfiltrat, 10 kDa). Geneteknik eller rekombinante antigener er fraværende i cellerne i BCG-vaccinen og andre mykobakterier. Ved anvendelse af tuberkulin er resultaterne af IFN-y-induktionstesten sammenlignelige med resultaterne af tuberkulinhudtesten (direkte korrelation). Ved anvendelse af genetisk manipulerede antigener er testresultaterne mere specifikke og afhænger ikke af tidligere BCG-vaccination. Ved undersøgelse af vaccinerede personer, der ikke havde kontakt med en tuberkuloseinfektion, er testets specificitet 99%. Testens følsomhed blandt patienter med tuberkulose varierer fra 81 til 89%.

    Test og diagnostiske tests baseret på kortvarig dyrkning af helblodceller eller mononukleære celler isoleret fra blod med in vitro Mycobacterium tuberculosis antigener med efterfølgende bestemmelse af IFN-y koncentration eller beregning af antallet af T-lymfocytter syntetiserende IFN-y er blevet udviklet. Koncentrationen af ​​interferon syntetiseret in vitro, bestemt ved ELISA under anvendelse af monoklonale antistoffer, der binder IFN-y. Derefter bestemmes ved hjælp af en kalibreringsstandard IFN-y dets koncentration i testrøret eller brøndene på tabletten.

    Ved udførelse af Elispot-testen er antallet af T-lymfocytter syntetiseret IFN-y. regnet på overfladen af ​​koppen, dækket af antistoffer mod IFN-y.

    udviklerne af diagnostik baseret på induktionen af ​​IFN-y in vitro, som blev godkendt af det amerikanske stof- og produktbureau, hævder, at det ved anvendelse af testen er umuligt at differentiere latent tuberkuloseinfektion fra aktiv tuberkulose. Derfor har testen ingen direkte diagnostisk værdi i regioner med et højt infektionsniveau. Men i vores land kan det bruges til at differentiere tuberkuloseinfektioner hos børn fra allergier efter vaccination samt at vurdere niveauet af specifik immunitet i behandlingsprocessen.

    I øjeblikket er det indenlandske testsystem til bestemmelse af induktionen af ​​IFN-y-syntese ved specifikke tuberkuloseantigener in vitro undersøgt.

    Immunstatus og forløb af tuberkulose, immunkorrektion

    I processen med behandling af tuberkulose hos mennesker forekommer ændringer i antigenæmi og immunsystemets tilstand.

    Data om ændringer i ekssudater og væv er stort set modstridende. Det eneste, der med god grund kan bemærkes, er, at et betydeligt antal aktiverede T-lymfocytter normalt findes i tuberkulære granulomer.

    Det er fornuftigt at dvæle på to punkter, der er nødvendige for at forstå rollen som immunologiske mekanismer til behandling af tuberkulose hos mennesker:

    • Aids patienter har en særlig høj forekomst af multidrug resistens;
    • i tilfælde af multidrug resistens (og i fravær af HIV-infektion) er nedsat immunitet (primært T-celle linket) særligt signifikant.

    I tuberkulose anvendes forskellige metoder til immunkorrektion i vidt omfang: Disse er primært lægemidler, der primært virker på T-celleimmunitet og systemet med mononukleære fagocytter (thymushormoner, isofon, lakopid, polyoxidonium osv.). såvel som hele (svækkede) mykobakterier og deres komponenter.

    Molekylærbiologisk diagnose af tuberkulose

    Molekylærbiologiske metoder i diagnosen infektionssygdomme indbefatter primært metoder baseret på manipulation af bakterielle og virale patogener med genomiske materialer for at identificere specifikke genetiske materialer - DNA-segmenter med en nukleotidsekvens, der er specifik for denne art eller patogenstammer, for at analysere specifikke DNA-sekvenser i gener, der bestemmer patogenes følsomhed for visse lægemidler, samt at analysere funktionen hør aktivitet af visse gener af patogenet. Molekylære biologiske metoder anvendes i vid udstrækning i videnskabelig forskning og praktisk anvendelse til diagnosticering og kontrol af forskellige bakterie- og virusinfektioner efter opdagelsen i 1985 af Kerry Mulllis (Nobelprisvinder 1989) af polymerasekædereaktionen.

    Principper og muligheder for polymerasekædereaktionsmetoden

    PCR giver dig mulighed for at amplificere (multiplicere) in vitro nukleotidsekvensen (patogen DNA-fragment) i flere timer millioner gange. Gennemførelsen af ​​reaktionen i nærvær af enkelte tråde af DNA bestemmer analysens ekstremt høj følsomhed.

    Nukleotidsekvensen af ​​visse sektioner i DNA-kæden bestemmer den genetiske identitet af mikroorganismen, hvilket forklarer PCR's høje specificitet.

    Værdien af ​​denne metode til påvisning og undersøgelse af egenskaberne ved Mycobacterium tuberculosis skyldes mikroorganismens biologiske egenskaber med meget langsom vækst: dubletiden af ​​Mycobacterium tuberculosis DNA under dyrkning er 12-24 timer.

    Princippet om PCR-metoden er amplifikation - flere, millioner af gange. multiplikation af sektioner af en specifik DNA-sekvens i en testrør-mikrovolumen med cyklisk gentagelse af de følgende tre trin af reaktionen, der hver især finder sted i et forskelligt temperaturregime:

    • Trin I - Denaturering af dobbeltstrenget DNA, når det opvarmes med divergensen af ​​dets kæder;
    • Trin II - komplementær binding (hybridisering) af primere (primeroligonukleotider) med endeafsnittene af de strengt specifikke kæder valgt til multiplikation af DNA-fragmentet;
    • Trin III - færdiggørelse af kæden af ​​DNA-fragmentet under anvendelse af en termostabil DNA-polymerase.

    Til amplifikation in vitro skal der være template DNA molekyler. fire typer deoxynucleosidtriphosphater (nukleotider) indeholdende de tilsvarende nitrogenbaserede baser: adenin (A), thymin (T), guanin (D), cytosin (C); kunstigt syntetiserede frøoligonukleotider (primere) bestående af 18-20 basepar; termostabilt DNA-polymeraseenzym med et optimum på 68-72 ° C og magnesiumioner.

    Specificiteten af ​​PCR afhænger af valget af DNA-fragment. I overensstemmelse hermed syntetiseres flankefrøoligonukleotider. Specificiteten af ​​hybridisering og afslutning af DNA-kæden bestemmes ved komplementaritetsprincippet af de følgende par nitrogenholdige baser: adenin-thymin, guanin-cytosin.

    For at bestemme genomet af mycobacterium tuberculosis-komplekset var det mest effektive mål for amplifikation i de fleste testsystemer DNA fragmentet IS6110, som i de fleste stammer af mycobacterium tuberculosis har et signifikant antal (10-20) gentagelser i genomet, der giver sammen med specificitet den høje følsomhed af analysen. På samme tid er stammer af Mycobacterium tuberculosis med et lille antal gentagelser eller fraværet af et IS6110 fragment blevet beskrevet.

    Isolering af DNA-molekyler fra en biologisk prøve

    Til udførelse af PCR skal patogenes DNA molekyler isoleres fra biologisk materiale i et minimumsvolumen med en minimal mængde ikke-uopsigeligt DNA og forskellige inhibitorer af enzymet-DNA-polymerasen.

    Prøveforberedelse bør udføres under betingelser, som forhindrer krydskontaminering af de undersøgte prøver ved udskilt DNA-molekyler. Til dette formål er det nødvendigt at forbehandling rummet med ultraviolet lys, gulvene og arbejdsfladerne på borde og apparater - klorholdige opløsninger. Det er også nødvendigt at bruge rene handsker, engangsrør og tip til automatiske pipetter.

    For at isolere DNA fra Mycobacterium tuberculosis fra kliniske prøver (cerebrospinalvæske, bronchial lavage), der ikke indeholder et stort antal leukocytter, celleaffald eller salte, er det nok at centrifugere prøven ved 3-4 tusinde omdrejninger pr. Minut, tilsæt 20-30 μl 2% opløsning til sedimentet triton X-100 og varm til 90 o C i 30 minutter.

    Til fremstilling af sputumprøver kræves effektiv fortynding, for hvilken der normalt anvendes 4% natriumhydroxidopløsning og N-acetyl-L-cystein (NALC) i mængden 50-80 mg pr. Prøve afhængigt af prøveviskositeten. NALC-opløsningen skal fremstilles ex tempore, eller NALC-pulveret kan tilsættes i tør form direkte til prøven. Efter fortynding skal prøverne centrifugeres i 15 minutter ved 3,5-4 tusinde omdrejninger pr. Minut (3000 g) i 50 ml rør med skruehætter, dvs. under de samme forhold, som anbefales til prædåing af sputum.

    Til ekstraktion af DNA fra sediment anvendes en metode baseret på anvendelsen af ​​en 5-6 molar opløsning af guanidinisothiocyanat som lyseringsreagens og mikroporøse silica partikler ("diatoméjord") sorberende DNA-molekyler mere almindeligt. Ikke-specifikke stoffer, herunder mulige inhibitorer, vaskes derpå i en 2,5 molar opløsning af guanidinisothiocyanat og ethanolopløsning, hvorefter DNA-molekylerne desorberes i vand, og disse prøver anvendes til PCR. For at forenkle DNA-ekstraktionsteknologi erstattes "diatoméjord" ofte med magnetiske mikropartikler overtrukket med silica. På samme tid bruges i stedet for centrifugering et specielt magnetisk rør til mikrotestrør til at udfælde partikler.

    I Rusland er der udviklet en original metode til immunomagnetisk adskillelse af mycobakterier efterfulgt af ekstraktion af patogenets DNA. Til immunomagnetisk adskillelse af mycobacterium tuberkulose anvendes ferropartikler på 3-5 μm, overtrukket med siliciumoxid, hvortil polyklonale (kanin) antistoffer mod mycobakterier af tuberkulose er vedhæftet ved kemisk binding. Efter alkalisk lys neutraliseres sputumprøverne med en sur opløsning af Tris-HCI og inkuberes med en immunomagnetisk sorbent. Derefter opsamles immunopolypartiklerne ved anvendelse af en magnetisk pind med en udskiftelig spids, overført til et mikrovial, udfældet. 20-30 μl af en 2% Triton X-100-opløsning påføres og opvarmes i 30 minutter ved 90 ° C. Supernatanten anvendes som en DNA-skabelon til PCR-analyse.

    Et vanskeligt problem er isoleringen af ​​Mycobacterium tuberculosis DNA fra biopsiprover. Til lys af biopsi anvendes enzymprotein K ved en slutkoncentration på 200-500 mg / l ved en temperatur på 56 o med om natten. Derefter tildele en af ​​de kendte metoder. Et overskud af uspecifik DNA i PCR-analyse af biopsiprøver tjener ofte til at inhibere reaktionen, hvilket kræver gentagen ekstraktion af DNA.

    Resultater Detection Methods

    Efter afslutning af reaktionen identificeres de amplificerede patogen-DNA-fragmenter under anvendelse af forskellige metoder.

    En velkendt fremgangsmåde til gelelektroforese. På samme tid identificeres det opnåede DNA-fragment ved hjælp af en positiv kontrol indeholdende det ønskede specifikke DNA-fragment eller ved en tidligere kendt størrelse (antal nukleotidpar) af fragmentet, som bestemmes under anvendelse af en standard molekylær markør.

    I nærvær af et specifikt farvestof, ethidiumbromid, inkorporeret i dobbeltstrenget DNA. Det syntetiserede DNA-fragment detekteres som et bånd, der gløder under virkningen af ​​ultraviolet.

    Størrelsen af ​​DNA-fragmentet, bestemt ved elektroforese ved afstanden fra starten, skal svare til en kendt molekylvægtmarkør eller en positiv kontrol.

    Andre metoder til bestemmelse af PCR-resultater er baseret på hybridisering af enkeltkædede PCR-produkter med en biotin-mærket DNA-probe, der er komplementær til dem efterfulgt af påvisning ved enzymatisk reaktion, for eksempel ved binding til biotin af et streptavidin-alkalisk phosphatase-konjugat.

    Baseret på denne type detektion er PCR-analysatorer blevet oprettet, hvor detektion af PCR-resultater udføres automatisk som et resultat af at aflæse den optiske densitet i prøverne efter en enzymatisk reaktion har fundet sted.

    Ulemperne ved disse metoder ligger i mulighederne for intralaboratorisk kontaminering med ret korte fragmenter af DNA-molekyler. Disse molekyler, når de frigives til de nyligt undersøgte prøver, bliver matrixen til PCR og fører til falske positive resultater.

    I denne henseende er der for at undgå falske positive resultater indført strenge regler for adskillelse og isolering af lokaler: til isolering af DNA fra biologiske prøver; lokaler til påvisning af resultater (elektroforese) fra den rene zone. Disse værelser er en zone med sandsynlig forurening. Et andet isoleret område er et rent rum til indføring af testprøver af DNA i reagensglas med reaktionsblandingen til PCR. Endelig antages det, at hovedenheden - DNA-forstærkeren - skal flyttes til et separat, eventuelt kontorlokal.

    For at forhindre forurening med produkterne fra tidligere reaktioner - med ampiconer indeholder nogle PCR-testsystemer i stedet for deoxynucleosidthymidin deoxynucleosidurid, som i stedet indsættes i den tilsvarende position under syntese af kæden in vitro, dvs. den nitrogenholdige base thymin, som er til stede i det native DNA, erstattes af uracil. Uracil-DNA-glycosylase, der tilsættes til reaktionsblandingen til materialet, der skal analyseres, ødelægger kun de forurenende fragmenter med deoxyuridin, men ikke det native analyserede DNA. indeholdende deoxythymidin. Efterfølgende opvarmning ved 94 ° C inaktiverer dette enzym og interfererer ikke med PCR-amplifikation.

    Der er et testsystem baseret på isotermisk amplifikation af rRNA, for hvilken den omvendte transkription og syntese af DNA-molekyler udføres først. som igen er en skabelon til den efterfølgende syntese af RNA-molekyler. Amplikoner af RNA detekteres under anvendelse af en acridinfarvet DNA-probe under hybridisering i reaktionsrøropløsningen. Denne metode ud over høj følsomhed har den fordel at udføre analysen i et enkelt reagensglas, hvilket forhindrer kontaminering. Ifølge forfatterne når følsomheden af ​​denne metode i respiratoriske prøver 90% med en specificitet på 99-100%.

    Nye påvisningsmetoder implementeres i realtid PCR. Disse metoder kendetegnes primært af den kendsgerning, at PCR og påvisning af dets resultater udføres samtidigt i et lukket rør. Dette forenkler ikke kun analysemetoden, men forhindrer også kontaminering af laboratorierum og testprøver med produkter, der går forud for PCR.

    I realtids-PCR opstår detektering af resultaterne på grund af fluorescensen, der opstår ved hybridiseringen af ​​en fluorogen DNA-probe med et specifikt DNA-fragment amplificeret under PCR. Strukturen af ​​fluorogene DNA-prober er konstrueret på en sådan måde, at den fluorescerende markør frigives som følge af en enzymatisk reaktion eller distanceres fra fluorescens quenchermolekylet kun under specifik hybridisering med det ønskede DNA-molekyle amplificeret under PCR. Med en stigning i antallet af molekyler hybridiseret med en probe er forøgelsen i fluorescens til en detekterbar niveau proportional med antallet af molekyler af det amplificerede produkt. Da antallet af DNA-fragmentmolekyler fordobles under hver PCR-cyklus, er cyklusnummeret, hvorfra fluorescens bestemmes og forøget, omvendt proportional med antallet af DNA-molekyler i den oprindelige prøve. Hvis flere forskellige kendte koncentrationer af molekylerne af det tilsvarende DNA-fragment af Mycobacterium tuberculosis indføres i reaktionen som en kalibrator, kan antallet af DNA-genomer i det undersøgte materiale beregnes ved anvendelse af et computerprogram.

    Hver standardprøve duplikeres. Et kvantitativt kriterium er det mindste antal PCR-cyklusser, der kræves til start og vækst af den detekterede fluorescens. Abscissen er antallet af cyklusser; ordinataksen er værdien af ​​fluorescens. Koncentrationen af ​​DNA er omvendt proportional med antallet af cyklusser, der er nødvendige for udseendet af fluorescens. I vinduerne i den højre kolonne (21-32) er cykeltallene for de respektive koncentrationer markeret. Forskelle mellem 10-foldede koncentrationer af DNA-fragmenter 10 2 -10 6 ml - 3,2-3,4 cykler. For to patienter var koncentrationen af ​​IS6110-fragmenter ca. 10 3 / ml og 10 4 / ml. Under hensyntagen til antallet af gentagelser (6-20) af de analyserede fragmenter i genomet af Mycobacterium tuberculosis er antallet af mykobakterier i kliniske præparater henholdsvis ca. 100 og 1000 celler.

    Anvendelsen af ​​PCR i diagnosen tuberkulose

    PCR-metoden er mest anvendt til den accelererede diagnose af tuberkulose - påvisning af mycobacterium tuberkulose i kliniske prøver: sputum. bronkialvaskninger, pleural eksudat, urin, cerebrospinalvæske, osteolyse punctates, kvindelige kønsorganer aspirater og forskellige biopsi prøver. I en undersøgelse i Holland omkring 500 prøver af sputum og bronchiale swabs fra 340 patienter med en bekræftet diagnose af pulmonal tuberkulose blev den sammenlignende følsomhed af PCR, kultur og smearmikroskopi undersøgt. Analysens følsomhed var henholdsvis 92,6,88,9 og 52,4%. I dette tilfælde var specificiteten af ​​alle metoder ca. 99%.

    En sammenligning blev foretaget af detektionseffektiviteten af ​​mycobacterium tuberculosis ved smearmikroskopi metoder, såning på Lowenstein-Jensen medium, WASTES test system og PCR analyse. PCR viste en følsomhed på 74,4%, mikroskopi - 33,8%, såning på et tæt medium - 48,9% og AFFALD - 55,8%. Den gennemsnitlige detektionstid for såning på Levenshtein-Jensen medium er 24 dage. AFFALD - 13 dage, PCR - 1 dag.

    Muligheden for at anvende PCR som en følsom og hurtig metode til overvågning af effektiviteten af ​​behandling for tuberkulose diskuteres også.

    Påvisning af Mycobacterium tuberculosis DNA ved PCR med effektiv kemoterapi bestemmes i længere tid - i gennemsnit 1,7 måneder sammenlignet med bakteriesekretionen detekteret ved fluorescensmikroskopi og 2,5 måneder i forhold til bakteriologisk undersøgelse.

    Diagnose af ekstrapulmonal tuberkulose

    Værdien af ​​PCR som en følsom metode er særlig stor for ekstrapulmonale former, da det er i disse former, at kliniske røntgenmetoder og traditionelle bakteriologiske metoder til bestemmelse af mycobacterium tuberkulose i diagnostiske materialer er ineffektive.

    Ved undersøgelse af urinprøver var resultaterne af PCR-analyser positive hos 16 af 17 patienter med aktiv tuberkulose i urinsystemet og negativ hos 4 patienter med inaktiv tuberkulose af nyrerne og 39 patienter med ikke-tuberkuløse sygdomme i urinsystemet.

    Effektiviteten af ​​PCR-analyse blev påvist ved undersøgelsen af ​​knoglemarvsaspirater hos patienter med feber af uklar genetik i mistanke om sygdommens tuberkulose-karakter. Til diagnosticering af tuberkuløs lymfadenitis hos børn blev 102 punkterings aspirat og biopsiprøver af 67 børn med mistænkt tuberkuløs lymfadenitis undersøgt. Positive resultater blev opnået: i realtid PCR - 71,6%. fluorescensmikroskopi - 46,3%. kulturstudier - 41,8%. I en undersøgelse af 50 lymfeknudebiopsier hos patienter med katskrabesygdom var alle resultater negative. Således blev en 100% specificitet af PCR-analysen demonstreret. I det samme arbejde blev der med punkteringsbiopsi af lymfeknuderne vist muligheden for at detektere M. avium.

    Diagnose af kvindelig genital tuberkulose med infertilitet er kendt for at være et af de sværeste diagnostiske problemer. En undersøgelse ved anvendelse af PCR af endometriebiopsier, endometrieaspirater og væskeprøver fra Douglas-pladsen hos 14 (56%) af 25 patienter, der blev undersøgt laparoskopisk med mistænkt tuberkulose, viste positive resultater. Ved anvendelse af smearmikroskopi og kulturstudier blev henholdsvis 1 og 2 opnåede positive resultater. Disse tilfælde var også PCR positive. De fleste PCR-positive resultater relateret til tilfælde med karakteristiske tegn på tuberkulose ifølge histologisk undersøgelse; et mindre antal - i tilfælde af mistænkt tuberkulose ifølge laparoskopi. Kun en positiv PCR-analyse blev opnået i fravær af laparoskopiske data for tuberkulose.

    Ved diagnosering af ekstrapulmonale former for tuberkulose har klinikere ofte et spørgsmål om muligheden for at detektere patogenet i PCR-undersøgelsen af ​​blodprøver. Litteraturdata indikerer, at DNA-detektion af Mycobacterium tuberculosis fra blodprøver er mulig med avancerede former for HIV-infektion. Mycobacterium tuberculosis DNA blev kun påvist i tilfælde af generaliseret tuberkulose hos forskellige organer hos patienter med transplanteret nyre og immunosuppression.

    Arteridentifikation af mykobakterier

    PCR-metoden kan være ret effektiv til hurtig identifikation af mycobacterium tuberculosis-komplekset og nogle typer ikke-tuberkuløse mykobakterier efter deres første vækst. I dette tilfælde kan brug af PCR spare 7-10 dage, der kræves til den efterfølgende kulturelle identifikation af et positivt resultat. Forskning ved PCR er teknisk set meget simpel, fordi det ikke kræver kompleks prøvepræparation af klinisk materiale for at opnå høj følsomhed. I undersøgelsen af ​​80 positive kulturer i et sådant testsystem (MB VasT. Fra firmaet Organon) var alle positive resultater af PCR-analysen strengt specifikke og blev udført i 1 dag. At identificere andre arter af mycobakterier ved fremstillingen af ​​DNA af patogenet kultur hybridiseret med specifikke DNA prober mærket med acridin og stammer detekteres ved fremkomsten af ​​kemiluminescens via kemiluminometer eller nitrocellulosestrimler med en visuel bedømmelse efter hybridisering. Med dette kit identificeres et begrænset antal arter: Mycobacterium tuberculosis komplekset. M. avium, M. avium complex, M. kansasii og M. gordonae.

    A.Telenti et al. De udviklede også en relativt enkel og billig metode til arten identifikation af klinisk vigtige mykobakterier baseret på PCR og efterfølgende behandling med to restriktionsenzymer (enzymer, som har egenskaberne til at skære DNA-molekylet på bestemte punkter). Når dette amplificeres, DNA-fragmentet. kodende varmechokprotein (65 kDa), hvorefter DNA-fragmentet af 439 nukleotidpar opnået ved PCR behandles separat af to enzymer - Bste II og Hae III. Ved anvendelse af agarosegelelektroforese analyseres de to opnåede produkter således ved bestemmelse af deres størrelser (antal nukleotidpar) ved anvendelse af et sæt standard DNA-fragmenter (molekylære DNA markører) med en længde fra 100 til 1000 nukleotidpar. I hver af visse arter (M. tuberculosis, M. avium, M. intracellulare, M. kansasii, M. fortuitum) findes 2 eller 3 DNA-fragmenter af forskellige størrelser for hvert restriktionsenzym. Kombinationen af ​​forskellige størrelse DNA-fragmenter opnået muliggør differentiering af disse arter indbyrdes.

    Teknologien for biologiske DNA-mikrochips udvikles. som vil hjælpe med at identificere mere end 100 typer mycobakterier i en undersøgelse.

    Arteridentifikation kan også udføres ved anvendelse af PCR-amplifikation af 16S rRNA-variable regionen efterfulgt af sekventering af ampliconerne, når de sammenlignes med den tilsvarende primære struktur, hvilket muliggør identifikation af mere end 40 arter af mycobakterier.

    Ved anvendelse af PCR kan arteridentifikation også udføres inden for mycobacterium tuberculosis-komplekset, herunder differentieringen af ​​M. bovis og M. bovis BCG. Til dette analyseres tilstedeværelsen eller fraværet af visse gener i de genomiske regioner af RD1. RD9 og RD10. RD1 er fraværende i M. bovis BCG, men er til stede i virulente arter, inklusiv M. bovis.

    Bestemmelse af lægemidlets modtagelighed for Mycobacterium tuberculosis ved anvendelse af PCR

    Opgaverne ved molekylære genetiske metoder til bestemmelse af lægemidlets modtagelighed eller resistens af Mycobacterium tuberculosis reduceres til identifikationen af ​​mutationer i visse nukleotidsekvenser af kendte gener. De vigtigste metoder er enten baseret på direkte læsning (sekventering) af disse sekvenser efter amplifikation eller hybridisering af biotin-mærkede DNA-fragmenter amplificeret under PCR med DNA-prober. Begge alternativer involverer identifikation af nukleotidsubstitutioner i sekvenserne, der ved hjælp af DNA-prober fører til fravær eller ufuldstændig hybridisering til en nitrocellulosemembran under anvendelse af enzymkonjugat (streptavidin-alkalisk phosphatase) - Metode LiPA-Rif-TB.

    Fremgangsmåden til måling af fluorescens i DNA-prober, der er lokalt fikseret på mikrosites, som er komplementære til kendte mutationer i PCR-amplificerede regioner af gener, der er ansvarlige for lægemiddelfølsomhed eller resistens, kaldes mikrobiochip-metoden. Grundalgoritmen til gennemførelse af denne undersøgelse er som følger. Efter isolering af DNA fra en klinisk prøve eller dyrkning af mycobakterier er nødvendigt at gennemføre PCR-amplifikation af de relevante fragmenter af rpoB-genet er ansvarlig for lægemiddelsensitivitet for rifampicin eller katG og Inha gener, der koder proteiner af Mycobacterium er ansvarlige for følsomhed over for Isoniazid. PCR-resultaterne vurderes under anvendelse af agarosegelelektroforese, hvilket bekræfter fremstillingen af ​​de tilsvarende DNA-fragmenter af den ønskede længde. Dette efterfølges af den anden runde PCR til indføring af en fluorescerende label i DNA'et. PCR-resultaterne bekræftes igen ved gelelektroforese. Derefter blev hybridisering udført (inkubation natten over), efterfulgt af vask det resulterende materiale på biochip, hvilket er et stort antal fast i en lille glasplade korte DNA-strenge (prober), som er komplementære til nucleotidsekvenser af lægemiddel-sensitive typen Mycobacterium tuberculosis på de steder mulige mutationer. såvel som mutante sekvenser der er ansvarlige for lægemiddelresistens. Arrangementet af DNA-prober på pladen er strengt bestemt, og niveauet af observeret fluorescens under hybridisering for at bestemme resultatet ved anvendelse af en speciel læser er indstillet. I denne forbindelse bestemmes resultaterne af analysen ved hjælp af et specielt computerprogram.

    I de senere år er alternative metoder til bestemmelse af lægemidlets modtagelighed for Mycobacterium tuberculosis baseret på realtids-PCR-teknologi blevet udviklet, hvilket gør det muligt at udføre disse undersøgelser i lukket tube-tilstand.

    I fig. 13-13 præsenterer resultatet af analysen af ​​kliniske kulturer af Mycobacterium tuberculosis ved bestemmelse af resistens mod rifampicin ved anvendelse af realtids PCR: 218 - kontrolprøve (følsom overfor rifampicin); 93 - positiv kontrol for Ser-Trp TCG-TGG mutation; 4482 - positiv kontrol for Ser-Leu TCG-TTG mutation; 162-322 - eksperimentelle prøver. Resultatet af beregning af de kinetiske amplifikationskurver for 4 kanaler: kanal 1: 393 - positiv kontrol for Ser-Trp TCG-TGG mutationen; kanal 2: 4482 - positiv kontrol for Ser-Leu TCG-TTG mutationen; 162, 163, 172, 295 - eksperimentelle prøver; kanal 4: kinetiske amplifikationskurver for alle prøver involveret i eksperimentet. Positiv kontrol amplifikationsreaktion. Konklusioner: Resultaterne af analysen afslørede følgende mutationer, som bestemmer resistens over for rifampicin: i prøver 162.163.172.295 - Ser-Leu TCG-TTG. Det samme princip anvendes til at bestemme lægemiddelresistensen over for isoniazid for katG- og inhA-generne, som bestemmer de hyppigste mutationer.

    Strainidentifikation af mycobacterium tuberkulose

    Den mest grundigt undersøgte fremgangsmåde til identifikation af stammer af Mycobacterium tuberculosis er en teknik kaldet restriktionsfragmentlængde-polymorfisme (RFLP RFLP,. Eller i den engelske version), og som er baseret på fragmentirovanin (restriktion) af Mycobacterium tuberculosis-DNA PvuII og fragmenterne opnået efterfølgende hybridisering med visse specifikke sekvenser på DNA dens gentagelseselement er IS6110. Intraspecifik variabilitet realiseres på grund af det forskellige antal gentagelser af IS6110 og deres placering på DNA'et. såvel som mangfoldigheden af ​​afstande mellem visse angrebssteder af enzym-restrictasen (restriktionssteder) og elementet IS6110. Denne teknologi er meget kompleks og tidskrævende. Efter behandling med DNA ekstraheret fra en kultur af Mycobacterium tuberculosis, er gelelektroforese udført med et restriktionsenzym, og derefter overført DNA-fragmenter af forskellige længder på en nitrocellulosemembran, blev hybridisering udført med fragmenter af IS6110-elementet og detekteres ved hjælp af enzymatiske reaktioner. Det resulterende specifikke mønster af bånd karakteriserer DNA'et af en specifik stamme af Mycobacterium tuberculosis. Brug af computeranalyse afslørede stammernes identitet eller affinitet. Selvom RFLP-metoden er den mest diskriminerende, dvs. afslører det største antal forskelle i de analyserede stammer, det er ineffektivt med et lille antal (mindre end 5) af IS6110 gentagelser observeret i nogle stammer. I fig. 13-14 præsenterer resultaterne af RFLP-typing af stammerne.

    Et alternativ kan være metoden til spoligotyping (spoligotyping) - en analyse af polymorfismen af ​​spacer-DNA-sekvenser - mellemprodukt mellem direkte gentagelser af DR-regionen. Ved udførelse af spoligotyping af stammer udføres PCR med primere, som begrænser DR-regionen, hvorefter fragmenter med forskellige længder dannes, som hybridiserer med variable mellemliggende regioner af DNA. Analyse af afstandsekvenserne af DR-regionen er præsenteret. ifølge forskere er det enklere, mere produktivt og egnet til primær screening af stammer og en foreløbig epidemiologisk analyse samt undersøgelsen af ​​direkte klinisk materiale.

    En mere effektiv og teknologisk tilgængelig metode er tydeligvis VNTR (forkortelse af engelske ord) eller en metode til bestemmelse af det variable antal eksakte tandem-gentagelser i DNA'et af Mycobacterium tuberculosis. Denne metode er kun baseret på brug af PCR og kræver ikke yderligere manipulationer. Da antallet af tandem-gentagelser i forskellige stammer og i forskellige loci er forskellig, bestemmes fragmenter af forskellige størrelser og analyseres på det resulterende elektroforegram af PCR-produkter. Ifølge forskerne opnås en større grad af diskrimination af stammer ved hjælp af VNTR end med RFLP-metoden.

    I de senere år er der blevet lagt stor vægt på spredning af Mycobacterium tuberculosis-stammer fra W-Beijing-familien (nogle gange kaldes de Beijing-stammen), der stort set er stofresistente.

    Grundlæggende krav til kvaliteten af ​​molekylærbiologiske undersøgelser

    Grundlæggende reguleringsdokumenter for PCR

    Bestemmelser fra Ruslands ministerium for sundhedsvæsen: Nr. 45 dateret 7. februar 2000. Nr. 109 dateret 21. marts 2003. Nr. 64 dateret 21. februar 2000. Metodiske retningslinjer: 1.3.1888-04 "Arbejdsorganisation under PCR-studier af materiale smittet med patogene biologiske midler til III-IV-patogenicitetsgrupper "; 1.3.1794-03 "Arbejdsorganisation under PCR-undersøgelser af materiale smittet med mikroorganismer i I-II-patogenicitetsgrupperne". 2003.; 3.5.5.1034-01 "Desinfektion af testmaterialet inficeret med bakterier i gruppe I-IV-patogenicitet ved anvendelse af PCR-metoden", 2001. Tillæg 11 til Instruktionen om ensartede metoder til mikrobiologisk forskning i påvisning, diagnose og behandling af tuberkulose

    Personalet

    Læger af klinisk laboratoriediagnostik, bakteriologer, virologer, biologer fra det kliniske diagnostiske laboratorium samt specialister med sekundær lægeuddannelse, der har bestået specialiseringen og avanceret træning på den foreskrevne måde, kan udføre molekylærbiologiske undersøgelser.

    Enhedslokaler laboratorium

    Følgende laboratoriefaciliteter er nødvendige:

    • Prøveforarbejdningsområdet er et laboratorium, der er tilpasset til at virke med infektiøse agenser i gruppe III-IV for patogenicitet i overensstemmelse med metodologiske retningslinjer 13.1888-04.
    • Zonen til fremstilling af reaktionsblandinger PCR - laboratorierum, som giver beskyttelse mod intern laboratorieforurening - "ren" zone.
    • • Hvis elektroforese eller hybridisering anvendes til analyse af PCR-produkter. laboratorierummet hvor de udbredte DNA-fragmenter ekstraheres fra amplifikationsrøret og følgelig kan frigives til miljøet i overensstemmelse med kravene til PCR-laboratorier (retningslinier 1.3.1794-03, retningslinier 1.3.1888-04) skal være fuldstændig isoleret fra de lokaler, der er angivet i de foregående afsnit. Bevægelsen fra elektroforesezonen til prøvebehandlingszonen og "ren" zonen af ​​ethvert personale, udstyr, materialer og genstande samt luftoverførsel gennem ventilationssystemet eller som følge af udkast bør udelukkes. Denne zone er ikke nødvendig til fluorimetrisk detektion af PCR-produkter.
    • Rummet til dokumentation og behandling af resultater er udstyret med computere og det nødvendige kontorudstyr. Udstyr kan placeres i dette rum for at detektere PCR-produkter uden at åbne røret. - fluorescerende PCR detektorer og termocyklere til real-time PCR.

    Sanitære og epidemiologiske krav til primær behandling af sputum svarer til de standard mikrobiologiske krav til arbejde med mycobakterier af tuberkulose.

    Komplet sæt laboratorieudstyr til PCR diagnostik

    Laboratoriepakken indeholder udstyr til følgende værelser.

    • Prøveforberedelsesrummet indeholder følgende udstyr: laminar II-beskyttelsesklasse "SP-1.2": en solid-state termostat med et opvarmet låg til Eppendorf type rør; mikrocentrifuge ved 13.000 omdr./min; centrifuge ("vortex"); et køleskab med et temperaturområde fra -20 ° C til +10 ° C; variable volumen pipetter fra Proline serien; pumpe med OM-1 kolbefælde pipettestativ; stativ arbejdssted 200x0,5 ml; stativ arbejdsstation 50x1,5 ml; stativer til opbevaringsrør 80x1,5 ml;
    • rum til fremstilling af reaktionsblandingen: PCR-boks til beskyttelseskammer ("Laminar-C, 110 cm); centrifuge - "vortex"; variable volumen pipetter fra Professional serien; pipettestativ; stativ arbejdssted 200x0,2 ml; stativer til opbevaringsrør 80x1,5 ml; et køleskab med et temperaturområde på -20 o C til + 10 o C;
    • elektroforese rum: et kammer til vandret elektroforese; strømforsyning; transilluminator;
    • DNA-amplifikator eller analysator af nukleinsyrer (realtids-PCR) med en computer og software; kan placeres i ethvert frit værelse. Hvis du bruger PCR-teknologi i realtid. elektroforese rum er ikke nødvendigt.

    Ekstern kvalitetskontrol

    For at have tillid til at opnå objektivt pålidelige resultater, bør laboratorier deltage i systemet med ekstern kvalitetsvurdering af laboratorieundersøgelser.

    Deltagere i kvalitetsstyringssystemet modtager; 12 ampuller med lyofiliserede suspensioner af bakterielle celler, hvoraf to indeholder E. coli E. coli, 3 ampuller med mycobacterium tuberculosis (avirulent stamme) i en koncentration på 10 2 / ml; 3 ampuller med celler af en lignende stamme i en koncentration på 10 4 / ml; 2 ampuller med ikke-tuberkuløse mykobakterier M. avium-intracellulare og M. kansasii i en koncentration på 10 5 / ml.

    Distribuerede prøver til ekstern kvalitetsvurdering er forprøvet i to uafhængige laboratorier med stor erfaring på dette område.